摘要: 目的　N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基2B(NR2B)及其磷酸化参与大脑缺血/低氧神经损伤。低氧预适应(hypoxic preconditioning, HPC)作为一种内源性保护干预措施,可以保护大脑免受缺血/低氧损伤。本研究拟通过体内和体外实验研究HPC对海马细胞中NR2B及其两个酪氨酸位点(1252和1336)磷酸化的影响,探讨其在HPC神经保护中的作用。 方法　6~8周龄雄性SPF级ICR小鼠和小鼠海马神经元细胞系HT22重复暴露于低氧环境复制HPC动物模型和细胞模型。免疫蛋白印迹和免疫荧光检测HPC小鼠海马和HT22细胞中NR2B的水平及其酪氨酸1336(pY1336NR2B)和1252(pY1252NR2B)的磷酸化水平。通过免疫蛋白印迹分析NR2B、pY1336NR2B和pY1252NR2B在突触部位(TxP)和突触旁部位(TxS)中的分布,同时检测指示细胞凋亡的cleaved caspase-3和α-spectrin的水平。 结果　HPC下调小鼠海马和HT22细胞中NR2B和pY1336NR2B的水平。小鼠海马突触旁部位(TxS)中NR2B和pY1336NR2B水平的变化与海马和HT22细胞中的变化相似,而突触部位(TxP)中的变化则表现出相反的趋势。 结论　NR2B和pY1336NR2B的下调可能参与了HPC诱导的神经保护作用,它们在突触和突触旁的定位可能在神经保护中发挥不同的作用。

摘要: 目的　探讨草苁蓉纳拉苷(Boschniakia rossica boschnaloside,BRBN)对SMMC-7721肝癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)以及侵袭、迁移的抑制作用。 方法　用转化生长因子β₁(transforming growth factor β₁,TGF-β₁)诱导SMMC-7721肝癌细胞建立EMT模型。将其分为对照组、模型组、BRBN组,利用细胞划痕愈合实验检测肝癌细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测肝癌细胞侵袭能力,Western blot法检测E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、Slug、Twist1、ZEB1及信号转导和转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的蛋白表达。 结果　TGF-β1使SMMC-7721肝癌细胞发生纤维状间质样改变,E-钙黏蛋白表达下调,N-钙黏蛋白和波形蛋白表达上调,提示SMMC-7721细胞获得间质表型。与模型组比较,BRBN组SMMC-7721细胞侵袭率和迁移率均显著降低(P<0.05),E-钙黏蛋白表达显著升高(P<0.05),N-钙黏蛋白和波形蛋白表达显著降低(P<0.05),Slug、Twist1、ZEB1蛋白表达均显著下调(P<0.05),STAT3磷酸化水平显著降低。 结论 BRBN可抑制SMMC-7721肝癌细胞侵袭、迁移,其作用机制可能与STAT3介导的EMT逆转有关。

摘要: 目的　研究大气PM2.5和高盐饮食联合暴露对小鼠肝炎症和淋巴生成的影响。 方法　将32只C57BL/6J小鼠随机分为:对照组,PM2.5组,高盐(HSD)组和PM2.5+高盐组。高盐组和PM2.5+高盐组小鼠连续8周给予8%高盐饲料,其余两组连续8周给予含盐0.4%的对照饲料;PM2.5组和PM2.5+高盐组小鼠采用气管滴注法进行PM2.5染毒(每周2次);其余两组小鼠通过气管滴注法滴注等体积生理盐水(每周2次)。在PM2.5染毒结束24 h后,将全部小鼠处死。测定小鼠肝炎性细胞因子TNF-α和IL-6水平;用免疫荧光染色法观察肝LYVE1表达水平;用蛋白免疫印迹法测定肝淋巴生成标志蛋白PROX1和LYVE1以及淋巴生成调节蛋白VEGFR-3和VEGF-C蛋白质表达水平。 结果　与对照组相比,高盐组小鼠肝组织TNF-α和IL-6水平以及肝组织PROX1、LYVE1、VEGFR-3和VEGF-C蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。与高盐组相比,PM2.5+高盐组肝组织TNF-α和IL-6水平以及肝组织PROX1、LYVE1、VEGFR-3和VEGF-C蛋白表达水平显著增加(P<0.05);并且PM2.5和高盐饮食对以上指标的影响具有交互作用。 结论　大气PM2.5和高盐饮食联合暴露显著加重了小鼠肝炎症,并且可能通过上调肝VEGFR-3/VEGF-C蛋白质表达增加淋巴生成。

摘要: 目的　本研究旨在评估瓜蒌薤白半夏汤(Gualou Xiebai Banxia Decoction, GXBD)对动脉粥样硬化 (atherosclerosis, AS) 模型小鼠的治疗效果,并探讨其作用机制。 方法　实验采用ApoE^-/-雄性小鼠,通过16周高脂饮食诱导AS模型。小鼠随机分为模型组、对照组、不同剂量的GXBD治疗组及降脂药组。通过HE染色和油红染色观察动脉壁和斑块的变化,并通过短链RNA (microRNA, miRNA) 测序分析GXBD的调控作用。应用蛋白免疫印迹实验 (Western blot) 和免疫荧光实验验证关键蛋白的表达变化。 结果　结果显示,GXBD能够显著减少动脉斑块的形成。miRNA测序分析发现,GXBD对多个与AS相关的miRNA基因具有调控作用,尤其是通过调节表皮生长因子底物蛋白1 (epidermal growth factor receptor pathway substrate 15 (EPS15) interacting protein 1, Epsin1) 和成纤维细胞生长因子受体1 (fibroblast growth factor receptor 1, FGFR1) 等关键蛋白的表达,对AS产生潜在治疗效果。进一步的Western blot和免疫荧光实验验证了这些调控作用。 结论　研究结果表明,GXBD可通过调控miR-3102-5p、miR-3547-5p、miR-7080-5p下调AS小鼠主动脉内皮Epsin1表达,同时上调FGFR1蛋白表达,抑制内皮细胞的间充质转化,在AS的治疗中具有显著疗效。

摘要: 目的　探讨DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)调控LSM4蛋白(Sm-like protein-4, LSM4)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及机制研究。 方法　将ApoE^-/-小鼠(12只)均分为2组,给予普通饲料喂养设为饮食对照组(ND组,n=6),给予高蛋氨酸饲料喂养设为高蛋氨酸组(HMD组,n=6);NCTC1469小鼠正常肝细胞分为正常对照组(Control组,0 μmol/L Hcy)、Hcy干预组(Hcy组,100 μmol/L Hcy)、转染干扰片段对照组(si-NC组,0 μmol/L Hcy)、转染LSM4干扰片段组(si-LSM4组,0 μmol/L Hcy)、转染DNMT1干扰片段组(si-DNMT1组,0 μmol/L Hcy)、Hcy干预下对照干扰组(Hcy+si-NC组,100 μmol/L Hcy)、Hcy干预下LSM4干扰组(Hcy+si-LSM4组,100 μmol/L Hcy)和Hcy干预下DNMT1干扰组(Hcy+si-DNMT1组,100 μmol/L Hcy);NCBI数据库分析LSM4在多种组织中表达;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测小鼠组织(HMD组和ND组)和肝细胞(Control组和Hcy组)LSM4蛋白表达差异;Western blot检测凋亡指标Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)和B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达变化;流式细胞术检测Control组、Hcy组、Hcy+si-NC组和Hcy+si-LSM4组细胞凋亡率变化;MethPrimer在线软件分析LSM4启动子区CpG岛;qRT-PCR和Western blot检测Hcy+si-DNMT1组中LSM4蛋白表达。 结果　与ND组、Control组相比,HMD组、Hcy组LSM4蛋白表达显著增高(P<0.05);与Control组比较,Hcy组中Bax蛋白表达显著上调(P<0.05),而Bcl-2表达明显降低(P<0.05);与Hcy+si-NC组比较,Hcy+si-LSM4组中Bax蛋白表达量显著减少(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量明显增多(P<0.05);与Control组相比,Hcy组细胞凋亡率显著升高(P<0.05);相较Hcy+si-NC组,Hcy+si-LSM4组细胞凋亡率下降(P<0.05);MethPrimer在线软件分析显示LSM4启动子区GC含量丰富且存在1个CpG岛;与Hcy+si-NC组相比,Hcy+si-DNMT1组LSM4蛋白表达增高(P< 0.05)。 结论　DNMT1通过调控LSM4低甲基化使其表达升高,从而促进Hcy诱导的小鼠肝细胞凋亡。

摘要: 目的　本研究旨在利用CRISPR/Cas9系统构建Lep基因敲除小鼠(C57BL/6N-Lep^em1 /Nifdc,简称ob小鼠),作为肥胖症、糖尿病等临床疾病体内药物评价的动物模型。 方法　根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计能够靶向小鼠Lep基因的sgRNA,经体外转录,与Cas9 mRNA一并注射入小鼠受精卵。随后提取出生小鼠的鼠尾DNA,采用PCR检测及测序技术,得到阳性小鼠。将其与野生型小鼠进行交配传代,最终获得纯合ob小鼠,并对纯合ob小鼠进行血清生化指标检测及肝病理检测。 结果　经鉴定,共得到8只阳性小鼠,经筛选传代,得到能够稳定遗传的阳性小鼠。纯合ob小鼠的血清生化指标甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、谷丙转氨酶(alaninne aminotransferase,ALT)含量均显著高于野生型小鼠。肝病理检测结果表明,纯合ob小鼠的肝中存在明显的炎症浸润及脂肪空泡样病变。 结论　成功建立Lep基因敲除小鼠,丰富了国家啮齿类实验动物资源库,为药物临床前评价提供了动物模型支持。

摘要: 目的　探讨CdCl₂与尼古丁联合作用对小鼠精原GC-1细胞周期和凋亡的影响及其联合作用方式。 方法　设置CdCl₂组、尼古丁组以及联合作用组24 h(简称联用组)3组,采用CCK-8法检测对GC-1细胞增殖的抑制,流式细胞术检测对GC-1细胞周期和凋亡的影响。 结果　随着浓度的升高,CdCl₂、尼古丁对GC-1细胞增殖的抑制作用增强,CdCl₂、尼古丁对GC-1细胞的24 h IC₅₀分别为5.409和2814 μmol/L。CdCl₂和尼古丁联用,在尼古丁浓度为0.175、0.350、0.700、和1.400 mmol/L时,其对GC-1细胞的IC₅₀分别为4.422、4.532、3.309和2.532 μmol/L,呈明显的递减过程,均低于CdCl₂单独作用组,CdCl₂和尼古丁联合作用时具有协同作用。细胞周期结果显示,CdCl₂浓度为2.5 μmol/L时联用组G2 /M期细胞占比上升(P<0.01),与CdCl₂组、尼古丁组比较,联用组增强将细胞阻滞在G2 /M期的效应,对细胞周期的影响具有协同作用,且CdCl₂对于协同作用的影响更强。细胞凋亡结果显示,与CdCl₂组、尼古丁组比较,联用组细胞凋亡比例显著增加(P<0.01),对细胞凋亡的影响具有协同作用,且CdCl₂对于协同作用的影响更强。 结论　CdCl₂和尼古丁联合时具有协同作用,对小鼠精原细胞毒性作用增强,细胞周期发生阻滞,促进凋亡,且CdCl₂对协同作用的影响更强。

摘要: 目的　利用斑马鱼建立不同睡眠剥夺模型,为失眠的基础研究提供更多可重复性的实用建模参考方案。 方法　用持续光照(150 Lux)和光照加咖啡因两种干预手段诱导斑马鱼失眠模型,随机将斑马鱼分为空白组、光照组、咖啡因组(100 μmol/L)和联合组。利用旷场实验和昼夜节律行为学实验观察各组斑马鱼运动能力的区别;利用qPCR技术与ELISA技术检测相关睡眠基因与5-HT神经递质的表达与分泌情况。 结果　与空白组相比,光照组斑马鱼睡眠时间、静息时间(白天)、睡眠回合明显减少(P<0.01或p=0.01),移动距离较空白组明显增加(P<0.01)。联合组与咖啡因组斑马鱼静息时间(白天)、睡眠回合较空白组增加(P<0.01)。联合组与咖啡因组斑马鱼活动距离无统计学意义(P>0.05);与空白组相比,光照组中心区域游动距离百分比与中心区域游动时间百分比均降低(P<0.05);与光照组相比,咖啡因组中心区域游动距离百分比与中心区域游动时间百分比均降低(P<0.01);与空白组相比,6:00与12:00光照组斑马鱼HTR1aa mRNA表达呈上调趋势(P<0.05),光照组与联合组斑马鱼体内HTR1ab mRNA水平表达均无明显统计学意义(P>0.05);与空白组相比,6:00时光照组的5-HT分泌量均减少(P<0.01);12:00光照组与联合组5-HT量均减少(P<0.01);18:00时光照组与联合组分泌量依然低于空白组(P<0.01)。 结论　单纯光照法最适用于斑马鱼幼鱼长效失眠模型的建立,其相关机制可能与HTR1aa基因以及5HT等生物因子有关。

摘要: 目的　探究通过3D-TOF-MRA方法确认长爪沙鼠实验前条件的可行性。 方法　使用7.0T MRI扫描仪对长爪沙鼠脑动脉进行扫描,扫描数据采用RadiAnt DICOM Viewer软件进行后续处理;采用乳胶灌注法对影像学结果进行验证与比较;通过MIMICS软件对长爪沙鼠及大鼠的后交通支及周围脑血管进行三维重建;使用此方法筛选血管发育异常的长爪沙鼠个体验证本方法的应用效果。 结果　3D-TOF-MRA技术可以有效地观察到活体长爪沙鼠脑动脉;3D-TOF-MRA技术观察长爪沙鼠脑主要动脉血管的准确性较高,并且能观察组织内部血管,但对于较细血管分支的观察效果不如乳胶灌注法;3D-TOF-MRA技术所得数据可以用于血管的三维重建;3D-TOF-MRA技术应用于长爪沙鼠脑动脉结构异常个体的筛选具有较好效果。 结论　3D-TOF-MRA技术可以应用于活体长爪沙鼠脑动脉的结构观察及相关研究。

摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种退行性神经系统疾病,可导致患者认知功能减退、精神行为异常和日常生活能力下降。色氨酸是人体的必须氨基酸,通过3个主要代谢途径分别生成犬尿氨酸、5-羟色胺(5-HT)和吲哚衍生物;通过影响色氨酸的代谢产物,能有效改善脑部的神经炎症,显著改善认知能力,直接或间接地影响AD的发生和发展,进而干预AD。本文查阅了近3年来中国知网、PubMed等数据库基于色氨酸代谢干预AD的研究文献,总结其作用机制,以期为抗AD药物的进一步研究提供参考。

摘要:创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是由外力因素直接或间接作用引起的脑组织结构或功能缺失的损伤。星形胶质细胞(astrocytes, AS)作为中枢神经系统的稳态细胞,在TBI早期阶段迅速增殖、活化,参与损伤后的神经炎症、血脑屏障破坏、胶质瘢痕形成、兴奋性毒性等一系列病理过程,在TBI的继发性神经损伤中扮演至关重要的角色。本文综述了星形胶质细胞在TBI损伤修复过程中的作用,旨在为TBI的预防和治疗提供新策略。

摘要:体积调节阴离子通道(volume-regulated anion channels,VRAC)在脊椎动物细胞和各类型的肿瘤细胞中普遍表达。其由富含亮氨酸重复序列8A(leucine-rich repeat containing 8A,LRRC8A)及其4个同源家族成员(LRRC8B-E)组成,其中LRRC8A为必需亚基。已证实LRRC8A/VRAC通过各种信号途径参与肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及多药耐药,并调控免疫细胞功能。该离子转运蛋白在杀伤肿瘤细胞及预防肿瘤中显示出良好的应用潜力,可作为肿瘤治疗的新靶点。本文综述了LRRC8A/VRAC参与肿瘤发生发展的最新研究,包括LRRC8A/VRAC的分子结构、功能及其在肿瘤中的调控作用,重点总结了LRRC8A/VRAC在肿瘤诊断和免疫治疗中的应用,以期为探索LRRC8A/VRAC成为肿瘤治疗的新靶点提供借鉴。

摘要:腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)作为一种隐匿型致死性疾病,其背后的发展机制尚不清楚。研究已经发现血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMCs)表型转换和细胞焦亡(cell pyroptosis)是与AAA产生发展密切相关的两种生物学过程,可能会成为揭示AAA发生机制的重要学说,为AAA的诊断和治疗提供新的方向。本文将通过介绍VSMCs表型转换和细胞焦亡与AAA之间的调控关系展开论述。

摘要:神经退行性疾病(neurodegenerative diseases,NDs)的发病率逐年增加,而目前针对NDs的药物基本以减轻症状为基础,并不是治疗性的,不能阻止疾病进展。外泌体是细胞外囊泡的一个子集,人体内几乎所有类型的细胞都可以产生外泌体,它被释放到细胞外环境后,通过多种方式发挥生物学效应。多种研究表明了外泌体虽然在中枢神经系统中具有两面性,但因其独特的生物学特性仍可作为NDs预防、缓解、治疗、诊断的工具。本文就外泌体的生物发生及其在神经退行性疾病中的作用作一综述,为临床治疗NDs提供新思路。

摘要:周围神经损伤(peripheral nerve injury,PNI)可由挫伤、骨折等创伤引起,导致感觉功能异常、运动功能受限、神经性疼痛、肌肉萎缩等多种继发性病变,严重影响患者的生活质量。PNI后会出现瓦勒变性,涉及轴突变性及髓鞘崩解现象。此外,由PNI引起神经性疼痛(NP)的一个至关重要的靶点是背根神经节(DRG),其作为感觉传导的初级神经元,在疼痛信号的传递中扮演着重要角色。因此,这些靶点的变化都会引发一系列复杂的信号通路变化。其中磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路作为重要的调控细胞生死存亡的重要信号传导通路,在PNI中表现为可促进雪旺细胞(Schwann cells,SCs)增殖迁移进而促进轴突生长、髓鞘形成等以促进神经再生,以及支持DRG神经元的存活以减轻NP。目前治疗方法包括有干细胞的移植、神经营养药物等,但都存在一定的局限性。研究显示,中医药以其成本低廉、副作用较少的优势,在PNI治疗领域逐渐引起重视并获得了一定程度的应用。本文就PNI中的氧化应激、凋亡、自噬、炎症、血管生成、细胞周期等病理生理机制与PI3K/Akt信号通路的关系及其相关分子靶点的研究展开论述,并深入分析基于PI3K/Akt信号通路的中药单体、中药复方及针灸对PNI治疗的潜在作用机制,以期为PNI的中医药疗愈提供系统规范的理论指导及相关药物的研发提供有益的参考依据。

摘要:多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是一种常见于妇产科的生殖内分泌代谢疾病。胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)、高雄激素血症(hyperandrogenemia,HA)是PCOS的两个重要特征,在其发生发展过程中起到重要作用。有研究发现,PCOS患者与线粒体氧化应激存在一定关系,这种氧化应激又受到多种因素的影响,尤其是IR和HA。该文综述了IR和HA与线粒体氧化应激之间的关系,以及对PCOS患者线粒体氧化应激的影响。

摘要:在临床上,许多疾病的发生与发展过程中常伴随着细胞缺氧的现象。缺氧不仅是疾病进展的一个重要标志,而且在推动疾病进程中也扮演着关键角色。因此,改善组织缺氧可能为治疗相关疾病提供新的策略。为了从细胞和分子层面深入研究这类疾病,构建细胞缺氧模型显得尤为重要。目前,常用的缺氧细胞模型主要分为化学性缺氧模型、物理性缺氧模型和糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型。本文将对不同类型的缺氧细胞模型进行综述,探讨在疾病研究中的应用与局限性。

摘要:骨关节炎(osteoarthritis, OA)是中老年人群中发病率较高的一种慢性退行性疾病,可导致患者关节疼痛、畸形和功能障碍,给患者及家庭造成痛苦。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ)是近年来发现的一种配体依赖的转录调节因子,可调控脂肪和糖类代谢、炎症及免疫进程。研究显示,PPARγ基因对OA软骨退变、滑膜炎症、脂肪病变起重要作用,并可通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、Wnt、沉默信息调节因子1(SIRT1)等信号通路影响OA进展。本文就PPARγ基因通过关节相关组织及关键信号通路调控OA病变的作用及机制作一综述。

摘要:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种高度复杂的神经退行性疾病,其发病机制受DNA甲基化、组蛋白修饰、非编码RNA的影响。在对帕金森患者脑组织及血液的研究中表明,DNA甲基化/组蛋白修饰水平改变、ncRNA及其靶基因的变异可能引发大脑神经退行性变化,并作为帕金森病的潜在非侵入性生物标志物。运动可通过逆转表观遗传改善衰老、PD引发的神经退行性病变。本文综述表观遗传在PD中的发病机制,探讨运动在其中扮演的角色,为运动通过调节表观遗传机制来改善PD提供理论参考。

摘要:小胶质细胞胞葬作用是指小胶质细胞吞噬受损和死亡细胞的过程,具有抗炎和促损伤修复的作用。最新研究表明,小胶质细胞胞葬在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)病理过程中发挥重要作用,可能是治疗AD的新靶标。因此本文综述了小胶质细胞胞葬与AD病理机制的关系以及胞葬相关分子作为AD治疗靶标的潜力,以期为AD的治疗提供新思路和新方法。

摘要:miRNA是一类内源性RNA分子,长度通常为19~25个核苷酸,通过识别同源序列并介入转录、翻译或表观遗传过程,来调节基因的表达水平。miRNA在深静脉血栓形成的发生、发展及治疗中展现出潜在的应用价值。深静脉血栓形成(DVT)是指深静脉腔内的血液异常凝结,阻塞静脉管腔,导致静脉回流障碍,多见于下肢,血栓脱落入肺可引起死亡。本文综述了近年来关于miRNA在DVT中的多元化作用机制。鉴于通过针对性的治疗手段调节miRNA的表达可能对DVT的康复具有促进作用,本文还详细讨论了miRNA在DVT临床诊断和治疗中的潜在应用,旨在为DVT领域的临床和基础研究提供有价值的参考。