摘要: 目的　探究KHSRP靶向调控JAK1/STAT3信号轴对肺腺癌(LUAD)恶性生物学行为的影响。 方法　收集2017年1月至2018年12月间在淮河医院确诊的64例LUAD组织及癌旁组织标本及临床病例资料。免疫组化法对比肺腺癌组织和癌旁组织中KHSRP的表达情况。qRT-PCR法检测肺腺癌细胞系(SPCA1、H1975、CL1-5、PC-9、Calu-3、H446)与正常人支气管上皮细胞系(NHBE)中KHSRP的表达差异。慢病毒转染改变肺腺癌细胞系SPC-A1、H1975、PC-9、Calu-3中的KHSRP表达情况;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、Transwell实验测定KHSRP对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。异种移植肿瘤模型检测敲降和过表达KHSRP在活体动物体内的作用。Western blot实验验证KHSRP靶向JAK/STAT信号通路。Rescue实验验证KHSRP是否通过调节JAK1/STAT3信号通路促进LUAD细胞的恶性进程。 结果　与癌旁组织相比,KHSRP在LUAD组织中的表达显著增高(P<0.05)。细胞功能实验分析显示,KHSRP过表达在体外显著促进LUAD细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。体内动物实验结果显示,KHSRP在裸鼠体内具有促进LUAD细胞移植瘤生长与肺结节转移的作用(P<0.01)。在敲降KHSRP后,JAK/STAT信号通路中JAK1、p-JAK1、STAT3水平明显降低,过表达KHSRP后情况则反之(P<0.05)。Rescue实验显示,KHSRP可以逆转敲降JAK1/STAT3对细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用(P<0.05)。 结论　KHSRP靶向JAK1/STAT3信号通路在肺腺癌中发挥致癌基因的作用。

摘要: 目的　非手术法建立高效、稳定的大鼠盆腔炎模型,并评估验证其在药效试验中的应用。 方法　雌性SD大鼠随机分为对照组、苯酚7 d模型组、苯酚10 d模型组、苯酚造模治疗组、低浓度菌液模型组、高浓度菌液模型组和菌液造模治疗组。模型组和治疗组SD大鼠以非手术法子宫腔注射25%苯酚凝胶、2×10⁷个或2×10⁸个大肠埃希菌和金黄色葡萄链球菌的混合菌,以构建盆腔炎模型。治疗组大鼠灌胃中成药金刚藤胶囊,对照组大鼠在相同时间给予等体积的溶剂溶液。观察大鼠的健康状况、体重变化和子宫外观;计算子宫系数;苏木素-伊红(HE)染色检测子宫和输卵管的病理变化、子宫内膜厚度和腺体数量;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平;免疫荧光染色检测巨噬细胞标志物CD68蛋白表达;Western blot检测大鼠子宫中TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达。 结果　模型组大鼠的死亡率只有5%;与对照组相比,造模后大鼠体重下降、子宫系数增加、子宫和输卵管出现不同程度的病理变化、内膜变薄、腺体数量减少、血清IL1β、IL-6、TNF-α的水平和子宫组织中巨噬细胞的数量显著增加、Toll样受体4/核因子-κB(Toll-like receptor 4/ nuclear factor kappa-B,TLR4/NF-κB)信号通路被激活;苯酚7 d模型和低浓度菌液模型被判定为轻度盆腔炎模型,苯酚10 d模型和高浓度菌液模型被判定为重度盆腔炎模型;中成药金刚藤胶囊治疗后,子宫和输卵管的病理症状明显缓解,符合临床盆腔炎的药效评估。 结论 通过非手术法利用苯酚和混合菌液建立的大鼠盆腔炎模型可以更好地模拟临床由于不同原因导致的不同程度病理状态的盆腔炎,适用于药物药效作用评价和盆腔炎病理机制的阐明。

摘要: 目的　建立柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6, CVA6)和B组1型(coxsackievirus B1, CVB1)混合感染叙利亚金黄地鼠手足口病动物模型。 方法　本研究将24只地鼠分为CVA6感染组、CVB1感染组、CVA6和CVB1混合感染组及对照组,采取鼻腔滴注病毒液和PBS方式造模。监测记录15 d内临床指标、生理指标、排毒情况,并在感染后第7天(D7)选取动物进行组织病理学和病毒抗原与核酸检测。 结果　单独和混合感染的实验组地鼠均出现类似人类手足口病的临床症状;WBC、NEUT、LYMPH结果提示病毒感染血象特征;咽拭子、粪便、血液和组织中均能检测到两种病毒核酸;粪便样品中能分离出两种病毒;脑等组织出现病理损伤表现及CVA6和CVB1病毒抗原蛋白和核酸的阳性共定位。 结论　经鼻腔同时滴注CVA6和CVB1混合液能够成功感染叙利亚金黄地鼠,复制出类似人类手足口病的疱疹、造成病毒性心肌炎和脑炎病理损伤等,结果显示混合感染组相较于单独感染组病情更为严重,表现为临床症状加重、病毒复制增高以及组织病理损伤明显。本研究为开展人类肠道病毒混合感染基础和临床研究提供一定借鉴和参考。

摘要: 目的　探讨香菇多糖(lentinan,LNT)对亚砷酸钠(sodium arsenite,SA)染毒小鼠肝组织铁死亡的干预效应与机制。 方法　C57BL/6N雄性小鼠经SA低剂量、高剂量染毒,以及LNT干预SA高剂量染毒后,苏木精-伊红(HE)染色评价肝组织病理损伤;酶联免疫吸附法或免疫蛋白印迹法检测肝组织肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor α,TNFα)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、铁自噬或铁死亡标志物含量或表达。 结果 与对照组相比,SA染毒诱导小鼠肝组织TNFα和IL-6水平升高,铁自噬标志物铁蛋白重链(ferritin heavy chain 1,FTH1)和微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,MAP1LC3B)含量升高,铁死亡标志物谷胱甘肽过氧化酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)水平下调(P<0.05);与SA高剂量组相比,LNT干预后显示肝组织病理损伤减轻,TNFα、IL-6、FTH1和MAP1LC3B水平下调,而GPX4水平上调(P<0.05);免疫蛋白印迹实验显示,LNT干预拮抗SA高剂量组FTH1、自噬标记蛋白LC3B/A水平升高或拮抗FTH1与LC3B或泛素(ubiquitin,Ub)共表达(P<0.05)。 结论　LNT拮抗SA染毒小鼠肝组织病理损伤和铁死亡,可能与TNFα-铁自噬信号抑制有关。

摘要: 目的　探究益肾逐瘀通络汤对膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)大鼠软骨细胞焦亡和铁死亡的影响。 方法　40只SD大鼠随机分为假手术组(10只)和造模组(30只);造模组大鼠右后肢膝关节均采用前交叉韧带离断术(anterior cruciate ligament-transection, ACLT)制作KOA模型,抽屉试验检测是否到位,造模操作后,驱赶大鼠每天强制活动30 min以诱导KOA模型,造模4 周后大鼠出现跛行、跳跃动作,且苏木素伊红(HE)染色出现软骨表层缺损变形和炎细胞浸润确认造模成功,造模成功后,大鼠随机分为模型组(n= 8)、塞来昔布组(n=8)和益肾逐瘀通络汤组(n=8)。各组大鼠给予生理盐水或药物灌胃干预,其中,假手术组和模型组大鼠灌胃10 mL/kg的生理盐水,塞来昔布组大鼠灌胃12 mg/kg的塞来昔布水溶液,益肾逐瘀通络汤组大鼠灌胃5.4 g/kg的中药水煎液,每天1次,连续8 周。干预完成后,麻醉大鼠,腹主动脉采血分离血清,分离膝关节,每组取3份膝关节固定于多聚甲醛,其他分离关节软骨组织备用。使用HE、番红固绿染色观察大鼠关节面软骨病理改变;micro-CT分析骨微结构;ELISA检测血清白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-18的蛋白表达量;逆转录定量PCR(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测细胞焦亡和铁死亡相关基因NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18、ACSL-4、FTH-1、GPX-4和COX-2的mRNA相对表达水平。免疫组化检测NLRP3、Caspase-1、COX-2蛋白表达情况。 结果　与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织表层缺损变形,整体各层细胞排列紊乱,番红固绿染色丢失较多,骨小梁稀疏、分布紊乱;血清炎症因子IL1β和IL-18升高(P<0.01);软骨组织NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18、ACSL-4和COX-2 mRNA表达量均升高(均P<0.01),FTH-1和GPX-4 mRNA表达量均下降(P<0.01)。与模型组比较,塞来昔布和益肾逐瘀通络汤组大鼠软骨表面较完整且平滑,细胞数量显著增多,番红固绿染色丢失较少,骨小梁致密、骨皮质丰厚,骨微结构均改善;血清炎性因子IL-1β和IL-18表达量下降(P<0.01);软骨组织NLRP3(P<0.01,P< 0.05)、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β和IL-18、ACSL-4和COX-2 mRNA(均P<0.01)mRNA表达量下降;FTH-1和GPX-4 mRNA相对表达量显著升高(P<0.01)。 结论　益肾逐瘀通络汤可通过抑制KOA大鼠软骨细胞焦亡和铁死亡,降低血清IL-1β、IL-18的水平,改善骨微结构,治疗KOA。

摘要: 目的　探讨蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路介导自噬参与肩袖撕裂(RCTs)相关肌肉萎缩运动康复的分子机制。 方法　40只雄性C57BL/6J小鼠随机分配到假手术组、RCTs组、RCTs+运动组和RCTs+运动+雷帕霉素组,每组10只。在分组处理后第8周,通过组织学分析骨-肌腱界面愈合和肌肉细胞萎缩情况。通过实时定量逆转录聚合酶链反应测量冈上肌肉组织中肌肉萎缩相关基因(Atrogin-1、Bnip 3、MuRF-1)的mRNA表达水平。通过免疫蛋白印迹检测不同组冈上肌组织中LC3、AKT/ mTOR信号通路表达,通过透射电子显微镜分析各组中自噬体的产生。 结果　与假手术组相比,RCTs组冈上肌腱止点骨-肌腱界面成熟评分、冈上肌纤维横截面积显著降低(P<0.001),肌肉损失以及Atrogin-1、Bnip 3、MuRF-1基因表达显著增加(P<0.001)。与RCTs组相比,RCTs+运动组冈上肌腱止点骨-肌腱界面成熟评分、冈上肌纤维横截面积显著增加(P<0.01),肌肉损失以及Atrogin-1、Bnip 3、MuRF-1基因表达显著降低(P< 0.01)。与假手术组相比,RCTs组冈上肌组织中LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、自噬体的数量显著增加(P<0.001),p-AKT/ AKT、p-mTOR/mTOR显著降低(P<0.01)。与RCTs组相比,RCTs+运动组LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、自噬体的数量显著降低(P<0.01),p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR显著增加(P<0.001)。雷帕霉素的加入显著逆转了RCTs+运动组的康复效果。 结论　本研究确定了运动康复在RCTs疾病中抗萎缩作用,其作用机制与激活AKT/mTOR信号抑制自噬有关。

摘要: 目的　“躺平”作为现代流行词汇,描述部分人群的心理状态,但其心理学含义仍未明确。一定条件下的动机缺乏可能是关键心理特征之一。 方法　将16只雄性SD大鼠随机分配到两种限食水平(分别为基线体重的90%和80%),并进行蔗糖颗粒自我给药任务,尝试建立“躺平”的动机缺乏动物行为模型,模型的建立分为3个阶段,第一阶段学习鼻触一次高回报侧获得一粒糖丸,第二阶段学习多次鼻触低回报侧获得一颗糖丸,第三阶段观察大鼠在高回报侧可以获得不同程度奖励的情况下,还是否愿意多付出努力在低回报侧获得糖丸。 结果　结合自给食训练和免疫印迹,结果显示:(1)大鼠在第三阶段出现“躺平”现象,即在高回报侧获得最大奖励的90%及以上,且低回报侧努力程度增大到断点时,大鼠放弃努力获得更多糖丸奖励。(2)与“未躺平”组的大鼠相比,“躺平”组大鼠伏隔核内的多巴胺D1受体表达显著升高,而D2受体表达没有显著差异。 结论　大鼠可表现出“躺平”样行为,伏隔核中D1受体表达上调可能是“躺平”动机缺乏的重要分子基础,该模型的建立扩展了对“躺平”的理解,并为其机制研究提供了新范式

摘要: 目的　观察去甲基化剂5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对大鼠原代肾肌成纤维细胞的周细胞肌成纤维细胞转化(pericyte-myofibroblast transition,PMT)的影响。 方法　取5-AzaCdR 250 ng/mL处理大鼠原代肾肌成纤维细胞72 h,采用焦磷酸测序方法检测促红细胞生成素 (erythropoietin,EPO)基因启动子甲基化程度,采用免疫荧光与Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(alphasmooth muscle actin,α-SMΑ)、血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor β,PDGFRβ)和DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a,Dnmt3a)的蛋白表达水平,并检测细胞上清液EPO水平。 结果 与对照组相比,5-Aza-CdR处理能显著降低Dnmt3a的表达和Epo启动子高甲基化水平,并随之降低了肌成纤维细胞中α-SMA的表达及α-SMA与PDGFRβ的表达比例,同时,5-Aza-CdR 处理提高了细胞上清液中EPO的水平。 结论　5-Aza-CdR可通过抑制大鼠原代肾肌成纤维细胞Epo启动子高甲基化逆转PMT。

摘要: 目的　为模式小鼠基因型批量鉴定工作建立高效的DNA提取方法。 方法　以鼠尾组织为实验材料,采用碱煮简化法、碱煮常规法、蛋白酶K裂解法和DNA提取试剂盒4种方法提取模式小鼠DNA,测定DNA模板纯度、浓度,评价凝胶电泳图的优劣,并比较4种方法所耗时长及实验成本。 结果　蛋白酶K裂解法提取的DNA浓度最高,碱煮简化法和常规法次之;试剂盒处理所得的DNA纯度较高,碱煮简化法次之。4种方法处理所得的DNA模板通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增、凝胶电泳后均可得到清晰的DNA目的条带。此外,碱煮简化法提取的DNA模板在-20℃ 保存1个月后仍可用于基因鉴定,且耗时最少、成本最低。 结论　模式小鼠批量鉴定基因型时,碱煮简化法是目前最简便、最快捷、最经济的DNA模板提取方法。

摘要:花粉变应原诱导的过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)又称季节性过敏性鼻炎(seasonal allergic rhinitis,SAR),通常发生在风媒植物的花粉散播期。在过去的30年里,SAR的发病率已增加了一倍多。SAR的病因复杂,涉及多种因素,包括花粉变应原的种类、环境气候因素、遗传因素、人体免疫状态等。动物模型是理解AR发病机制和推动有效防治策略发展的重要工具,本文通过总结近年来国内外关于花粉诱导AR动物试验的文献,系统阐述了影响模型效果的因素,包括动物品系、致敏材料(花粉抗原的制作及存在问题、佐剂的使用及存在问题)、造模的步骤和效果评价。这些内容旨在为建立合适的花粉诱导AR动物模型及其相关的基础研究和应用研究提供参考和支持。

摘要:生酮饮食(ketogenic diet,KD)是指一种饮食模式,旨在促进个体达到低卡路里含量、最低碳水化合物摄入量、高脂肪消耗和标准蛋白质水平。生酮饮食在临床实践应用治疗包括心脏病、糖尿病、肥胖、自闭症、胶质母细胞瘤和其他癌症等。然而,除了癫痫,生酮饮食尚未被推荐用于任何神经系统疾病。近年来随着对生酮饮食的深入研究,越来越多证据证明,生酮饮食对帕金森病(Parkinsons disease,PD)具有神经保护作用,是治疗PD的饮食新疗法。本综述详细论述生酮饮食在帕金森病中不同机制的神经保护作用,旨在对本领域的临床和实验研究提供一定的参考。

摘要:线粒体作为心肌细胞的主要能量供应站,在维持心脏正常运作中占据核心地位。线粒体自噬在维持心肌细胞稳态与应对应激方面扮演着极其重要的正面角色。随着心血管疾病的逐渐加剧,线粒体自噬的平衡状态正受到一系列尚未明确病理机制的显著挑战,导致线粒体受损,进而可能引发心肌细胞的损伤。此外,当线粒体自噬的功能无法满足机体的生理需求时,可能会触发线粒体功能障碍,进而加速心力衰竭的进程。本综述将探讨线粒体自噬及线粒体动力学在心脏中的具体作用方式,并结合主要心血管疾病探讨其机制,聚焦该领域最新的科研进展与重要发现。

摘要:随着全球癌症发病率的不断上升,肿瘤转移已成为导致大多数癌症患者死亡的主要原因。转移前生态位(pre-metastatic niche,PMN)的形成为肿瘤细胞的定植和转移提供了理想的微环境,极大地促进了肿瘤的扩散。在这一过程中,癌症相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)因其在肿瘤进展中的多重作用而备受关注。CAFs通过重塑细胞外基质、诱导上皮间质转化、刺激新生血管生成以及调控肿瘤免疫微环境,推动了PMN的建立和肿瘤细胞的侵袭性行为。这些作用不仅加速了肿瘤的转移进程,还为肿瘤的免疫逃逸创造了条件。本文综述了CAFs在肿瘤转移中的核心机制和功能,探讨了其在癌症研究和治疗中的潜在应用,为抗肿瘤转移策略的开发提供了新的视角与方向。

摘要:子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是全球女性健康面临的常见挑战。近年来,铁死亡作为一种新兴的细胞程序性死亡方式,在EMs研究中备受瞩目。在疾病机制方面,铁死亡通过铁过载诱导,推动卵巢EMs的纤维化,同时通过调控多条信号通路如p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)/信号转导子和转录激活子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6),促进血管生成、自噬等,加剧病情进展。在不孕问题上,铁死亡影响胚胎发育和卵巢功能,显著降低生育能力。诊断方面,铁死亡相关基因高表达为EMs的早期诊断提供了潜在的标志物,有效区分患者和健康个体,具有重要的临床应用价值。治疗策略上,Erastin等非天然化合物及白藜芦醇、熊果酸和汉黄芩素等天然化合物,展现出潜在的治疗效果,可缓解EMs的病理进程和相关症状。因此,本文通过综述铁死亡在EMs发病机制、不孕问题、诊断和治疗中的多重作用,全面阐述了铁死亡在子宫内膜异位症中的关键作用,探索其作为诊断标志物和治疗靶点的潜力,为EMs的管理提供新的理论支持和治疗策略。

摘要:肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)是一种致命性的疾病,其特征是肺血管重构,最终导致右心衰竭和死亡。目前PH治疗并不理想,晚期PH患者的总生存率没有实质性改善。尽管目前在PH发病机制方面取得了部分进展,但仍需在分子水平上进行更多探索,以开发更有效的PH治疗方法。近年来研究表明长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在PH病理生理过程中发挥重要的调节功能,并成为潜在的疾病生物标志物和治疗靶点。本文就近年来lncRNA在PH中的分子机制进行综述。

摘要:骨缺损修复是骨科领域亟待解决的难题,众多研究者致力于探索更为高效的治疗策略。然而,术后精准的骨修复效果评估也是一个重要环节。随着计算机断层扫描(computed tomography,CT)成像的发展,双能量CT成像在分析骨组织成分以及减少金属伪影方面展现出显著优势。本文就双能量CT成像在动物骨修复评估中的应用价值进行综述。

摘要:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)作为威胁人类生命最常见的恶性肿瘤之一,其严重影响着患者的生活质量。近年来,SHP2(src homology 2 domain-containing protein tyrosine phosphatase,SHP2)成为癌症领域中备受关注的焦点,已经被证实与CRC有着密切的关系。SHP2,由PTPN11基因编码,是一种非受体酪氨酸激酶,在人体各组织和细胞中普遍存在。现有研究显示,SHP2在调控CRC及结肠炎相关性结肠癌(colitisassociated colon cancer,CAC)中扮演关键角色,并随着SHP2变构抑制剂的出现,SHP2成为了CRC患者新的潜在的治疗靶点。本文主要针对SHP2的结构及其在CRC和CAC中的影响进行综述。

摘要:巨噬细胞是先天免疫中重要的免疫细胞,具有显著的异质性和极化性。在微环境中各种因子的刺激下可极化为各种表型(主要是M1和M2),从而发挥不同的作用和功能,在肾缺血再灌注损伤(renal ischemia-reperfusion injury,RIRI)的病理生理机制中发挥重要作用。过度的免疫反应必然会导致组织损伤,M1型巨噬细胞是促炎细胞,参与病原体的清除;而M2型巨噬细胞具有抗炎作用,参与RIRI后肾组织修复和重塑。巨噬细胞表型之间的平衡对于RIRI的结局和治疗十分重要。故本文从巨噬细胞极化角度切入,对巨噬细胞在RIRI中的病理生理机制和最新的治疗方案进行阐述,旨在为进一步研究巨噬细胞极化在RIRI中的作用提供参考,为通过调节巨噬细胞极化来改善RIRI的治疗策略提供思路。