摘要: 目的　基于网络药理学与细胞实验探讨黄芪治疗病毒性胰腺炎疗效及可能的作用机制。 方法检索TCMSP 数据库中黄芪的药物靶点,结合GeneCards 数据库中病毒性胰腺炎的疾病靶点,两者取交集获得黄芪治疗病毒性胰腺炎的靶点基因。基于DAVID 数据库完成治疗靶点的基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。治疗靶点经STRING 数据库与Cytoscape 3. 10. 2 软件分析其相互作用关系并筛选核心治疗靶点,采用PyMOL 3. 0 与AutoDock Tools 1. 5. 7 软件完成最主要有效治疗成分与核心靶点的分子对接,利用柯萨奇病毒B 组3 型(Coxsackie virus group B3, CVB3)构建病毒性胰腺炎细胞模型,并对上述核心靶点进行验证。 结果　经筛选获得78 个治疗靶点,富集分析结果显示,黄芪治疗病毒性胰腺炎可能涉及的信号通路有癌症通路、PI3K-AKT 信号通路、脂质与动脉粥样硬化等,此外,AKT1、TP53、HIF1A、CASP3、IL-6、MMP9 等基因可能是黄芪治疗病毒性胰腺炎的核心靶点。细胞实验 结果表明,模型组淀粉酶(amylase, AMY)表达水平显著升高(P<0. 05),黄芪组相较于模型组AMY、AKT1、TP53、HIF1A、CASP3、IL-6、MMP9 表达水平显著下降(P<0. 05)。 结论　黄芪注射液能有效治疗病毒性胰腺炎,并可能通过降低AKT1、TP53、HIF1A、CASP3、IL-6、MMP9 表达水平发挥治疗作用。

摘要: 目的　观察EV71型肠道病毒(Enterovirus 71, EV71)诱导骨骼肌损伤的影响,探讨caspase-1/IL-1β信号通路在EV71诱导的骨骼肌损伤中的作用机制。 方法　将1日龄BALB/c乳鼠随机分为3组,正常对照(normal control,NC)组60只、EV71感染组60只、caspase-1抑制剂(EV71+VX-765)组15只。正常对照组及EV71感染组各随机分为5 d、7 d、10 d、14 d 4个亚组,每亚组15只。将25 mL/kg 的EV71病毒液,腹腔注射到1日龄BALB/c乳鼠体内,连续注射3 d,建立EV71感染组模型。在病毒接种后6 h腹腔注射caspase-1抑制剂VX-765(20 mg/kg),连续10 d接种,直至取材,建立caspase-1抑制剂组模型。同时,正常对照组等体积注射含有5% DMSO+10% PEG300的生理盐水,6 h后注射2%的细胞维持液。造模成功后,记录各组BALB/c乳鼠体质量和疾病评分,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察骨骼肌病理损伤,蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测肠道病毒71型病毒蛋白1(Enterovirus 71 viral protein 1, EV71 VP-1)、前体胱天蛋白酶-1(pro-cysteine-dependent aspartate-specific protease-1, pro-caspase-1)、切割型胱天蛋白酶-1(cleaved cysteine-dependent aspartate-specific protease-1, cleaved-caspase-1)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta, IL-1β)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin, α-SMA)、I型胶原蛋白(Collagen type I, Collagen I)蛋白的表达。 结果　与同时间点正常对照组相比,EV71感染组乳鼠体质量减轻,疾病评分升高;EV71感染组乳鼠骨骼肌组织HE染色可见炎性细胞大量浸润、肌束断裂溶解,肌肉组织横截面积减少;Western blot结果显示,与正常对照组相比,EV71感染组乳鼠5 d、7 d、10 d骨骼肌组织匀浆中EV71 VP-1、IL1β、α-SMA和Collagen I水平均明显升高(P<0.001);与EV71感染组相比,EV71+VX-765组乳鼠体质量升高及临床疾病评分降低(P<0.01),Western blot与免疫荧光结果一致显示,caspase-1抑制剂可以显著降低EV71感染组乳鼠骨骼肌组织匀浆中EV71 VP-1蛋白表达(P<0.01),下调pro-caspase-1、cleaved-caspase-1、IL-1β和Collagen I蛋白水平(P<0.001),抑制caspase-1减弱了EV71病毒对BALB/c乳鼠骨骼肌损伤作用。 结论 EV71可能通过激活caspase-1/IL-1信号通路诱导骨骼肌损伤。

摘要: 目的　系统考察胆木浸膏糖浆对4日龄SD大鼠生长发育的影响及其毒性反应。 方法　根据整窝设计法将出生后第二天(postnatal day 2,PND2 )128例幼鼠随机分为阴性对照组和低、中、高剂量组,从PND4开始,各组对应经口给予纯水、31 g/kg、93 g/kg和280 g/kg(以生药量计)胆木浸膏糖浆,每天1次,重复给药18 d,停药后恢复观察15 d。随后,对各组动物一般状态、生长发育、神经反射功能、自发行为活动、血液学、凝血、血生化、免疫功能、生长激素及组织病理等指标进行检测。 结果　连续给药18 d后,与阴性对照组比较,中、高剂量组(雌、雄鼠)GLU升高(P<0.05或P<0.01);中、高剂量组(雌、雄鼠)LDH、(雄鼠)AST,高剂量组(雌鼠)ALT、AST均降低(P<0.05或P<0.01);低、高剂量组(雌、雄鼠)RET、RET (%),中剂量组(雄鼠) RET均升高(P<0.05或P<0.01);低、高剂量组(雌、雄鼠)、中剂量组(雌鼠)脾质量以及脏体系数均升高(P<0.05或P<0.01);低、中、高剂量组(雌、雄鼠)脾小结结构形成,体积大、数量多,且其变化程度呈剂量关系。停药恢复观察15 d后,与阴性对照组比较,低剂量组(雌鼠)GLU显著升高(P<0.05);中、高剂量组(雌鼠) ALT、AST、ALP、TG,中剂量组(雄鼠)GGT、TG、TCHO和高剂量组(雄鼠)AST、ALP、TG、LDH均降低(P<0.05或P<0.01);高剂量组(雌鼠)RET和(雄鼠)RET (%)均升高(P<0.05);与连续给药18 d后同组比较,各组动物脾结构发育更完整,脾小结结构明显,但各组间比较未见明显差异。其余各项检测结果未见明显药物相关变化。 结论　胆木浸膏糖浆可使4日龄SD大鼠脾结构提前发育完善,伴随其造血功能增强,同时引起动物血糖升高,糖代谢功能加强导致相关酶消耗增多,导致部分肝功能指标降低,呈剂量相关性,无性别差异,停药后可逆,变化机制需进一步探索证实。临床研究时需注意控制胆木浸膏糖浆的用药剂量,定期进行脾及相关血液、血生化指标监测。

摘要: 目的　系统考察胆木浸膏糖浆对4日龄SD大鼠生长发育的影响及其毒性反应。 方法　根据整窝设计法将出生后第二天(postnatal day 2,PND2 )128例幼鼠随机分为阴性对照组和低、中、高剂量组,从PND4开始,各组对应经口给予纯水、31 g/kg、93 g/kg和280 g/kg(以生药量计)胆木浸膏糖浆,每天1次,重复给药18 d,停药后恢复观察15 d。随后,对各组动物一般状态、生长发育、神经反射功能、自发行为活动、血液学、凝血、血生化、免疫功能、生长激素及组织病理等指标进行检测。 结果　连续给药18 d后,与阴性对照组比较,中、高剂量组(雌、雄鼠)GLU升高(P<0.05或P<0.01);中、高剂量组(雌、雄鼠)LDH、(雄鼠)AST,高剂量组(雌鼠)ALT、AST均降低(P<0.05或P<0.01);低、高剂量组(雌、雄鼠)RET、RET (%),中剂量组(雄鼠) RET均升高(P<0.05或P<0.01);低、高剂量组(雌、雄鼠)、中剂量组(雌鼠)脾质量以及脏体系数均升高(P<0.05或P<0.01);低、中、高剂量组(雌、雄鼠)脾小结结构形成,体积大、数量多,且其变化程度呈剂量关系。停药恢复观察15 d后,与阴性对照组比较,低剂量组(雌鼠)GLU显著升高(P<0.05);中、高剂量组(雌鼠) ALT、AST、ALP、TG,中剂量组(雄鼠)GGT、TG、TCHO和高剂量组(雄鼠)AST、ALP、TG、LDH均降低(P<0.05或P<0.01);高剂量组(雌鼠)RET和(雄鼠)RET (%)均升高(P<0.05);与连续给药18 d后同组比较,各组动物脾结构发育更完整,脾小结结构明显,但各组间比较未见明显差异。其余各项检测结果未见明显药物相关变化。 结论　胆木浸膏糖浆可使4日龄SD大鼠脾结构提前发育完善,伴随其造血功能增强,同时引起动物血糖升高,糖代谢功能加强导致相关酶消耗增多,导致部分肝功能指标降低,呈剂量相关性,无性别差异,停药后可逆,变化机制需进一步探索证实。临床研究时需注意控制胆木浸膏糖浆的用药剂量,定期进行脾及相关血液、血生化指标监测。

摘要: 目的　比较采用雷公藤多苷、环磷酰胺和顺铂构建卵巢储备功能减退(DOR)小鼠模型的效果。 方法　小鼠随机分成对照(Ctrl)组、雷公藤多苷(TWP)组、环磷酰胺(CTX)组和顺铂(DDP)组,TWP组以50 mg/kg雷公藤多苷混悬液灌胃小鼠14 d,CTX组以20 mg/kg环磷酰胺混悬液腹腔注射小鼠14 d,DDP组以1.5 mg/kg顺铂溶液腹腔注射14 d。统计小鼠体质量、子宫指数和卵巢指数;阴道涂片法观察小鼠动情周期变化;ELISA法检测小鼠抗缪勒管激素(AMH)、雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)变化情况;HE检测卵巢卵泡发育情况;统计卵母细胞成熟率和小鼠生育力。 结果　3组模型小鼠体质量、卵巢指数显著降低(P<0.05);动情周期紊乱,AMH、E2激素水平显著降低(P<0.05);发育中卵泡率降低,闭锁卵泡率升高(P<0.05);卵母细胞成熟率降低(P<0.05);妊娠率及总成活仔鼠数降低。 结论　通过雷公藤多苷、环磷酰胺和顺铂成功构建DOR模型小鼠,小鼠体质量、卵巢指数降低,动情周期、激素紊乱及卵巢储备功能下降,引起卵母细胞成熟率、妊娠率及总活产仔数降低;其中环磷酰胺组小鼠卵巢储备功能下降程度适当并具持续稳定性。

摘要: 目的　探讨生长分化因子-15(GDF-15)通过激活一氧化氮(NO)-环磷酸鸟苷(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠侧枝循环及心功能的影响。 方法　通过结扎冠状动脉左前降支,构建AMI大鼠模型,造模成功后,随机分成假手术组、模型组、GDF-15组,每组12只,GDF-15组腹腔注射GDF-15重组蛋白,其余2组注射等量生理盐水,每周2次,连续8周。超声心动图检测大鼠心功能;HE染色观察大鼠心肌组织病理损伤;CD31免疫组化染色观察大鼠侧枝循环的情况;qPCR检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达;取模型组和GDF-15组大鼠心脏组织进行转录组学测序,筛选差异表达基因(DEGs),通过京都基因和基因组百科全书(KEGG)对差异表达基因进行通路富集分析。试剂盒检测NO、活性氧(ROS)、cGMP表达水平;Western blot检测VEGF、eNOS单体、p-eNOS^ser1177单体、eNOS二聚体及PKG蛋白表达。 结果　与假手术组相比,模型组左室收缩末期内径(LVEDs)、左室舒张末期内径(LVEDd)增加(P<0.001),左室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)降低(P<0.001),心肌细胞坏死严重,梗死区血管密度降低(P<0.05),但VEGF mRNA和蛋白水平没有变化(P>0.05),NO、eNOS二聚体、cGMP水平及PKG蛋白表达水平降低(P<0.05),ROS、eNOS单体及p-eNOS^ser1177单体的表达水平增高(P<0.05);与模型组相比, GDF-15组LVEDs、LVEDd降低(P<0.05),LVEF、FS升高(P<0.01),心肌细胞坏死得到缓解,梗死区血管密度明显增加(P<0.0001),VEGF mRNA水平增高(P<0.0001),转录组学测序结果显示,共鉴定到324个DEGs,其中230个上调,94个下调。KEGG富集分析T20通路中cGMP-PKG信号通路差异最显著。VEGF、NO、eNOS二聚体、cGMP水平及PKG蛋白水平增高(P<0.05),ROS、eNOS单体及p-eNOS^ser1177单体的表达水平降低(P<0.05)。 结论　GDF-15可通过抑制eNOS解偶联并激活NO-cGMP-PKG通路,促进缺血心肌侧枝循环、改善心功能。

摘要: 目的　考察两种2型糖尿病模式鼠db/db和KK-Ay作为糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)模型的特点及差异性,并用厄贝沙坦(irbesartan )治疗验证。 方法　12周龄db/db及KK-Ay鼠各102只,根据尿微量白-蛋白肌酐比值(albumin-to-creatinine ratio, ACR)、24 h尿总蛋白(UCFP)每种模式鼠分别筛选出78只,分为6组,db/db+irbesartan 组和KK-Ay+irbesartan组分别给予irbesartan(40 mg/kg,)、db/db组和KK-Ay组分别给予等量实验动物饮用水,以及db/db+受试物A组和KK-Ay+受试物A组(给予不同剂量受试物A,本文受试物A组仅展示死亡动物数结果,其他结果未展示)。野生型C57BL/6J(WTa /WTb组)作为正常对照组,给予实验动物饮用水。每天临床观察,每周称体质量,不定期监测ACR、UCFP。给药结束解剖,取脑、肝、肺、肾,称体质量,计算脏器系数(脏器质量×1000/动物体质量),采血检测血清总蛋白(totla protein, TP)、白蛋白(albumin, Alb)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、葡萄糖(glucose, GLU)、甘油三酯(triglycerides,TG)、胆固醇(cholesterol, CHO)。肾组织HE、MASSON和PAS染色观察组织病理学改变。 结果　78只KKAy鼠8周共死亡5只,78只db/db鼠6周共死亡21只;ACR在db/db组、KK-Ay组均随鼠龄增加而升高,在db/db+irbesartan组和KK-Ay+irbesartan组降低但无统计学意义(P>0.05);UCFP在KK-Ay组随鼠龄增加而增大,irbesartan治疗后显著降低(P<0.05);与WT组相比,db/db组、KK-Ay组肾系数无明显变化,脑系数显著降低(P<0.01),肝系数显著升高(P<0.01),irbesartan治疗后无显著变化(P>0.05);与WT组相比,db/db组、KK-Ay组小鼠的血清GLU、TG显著升高(P<0.01),与KK-Ay组相比,KK-Ay+irbesartan组GLU、TG显著降低(P<0.01);db/db组、KK-Ay组小鼠肾均可见肾小球系膜基质增厚伴系膜细胞增生,irbesartan治疗后病变程度减轻。 结论　12周龄的db/db、KK-Ay小鼠均可作为DN研究模型。相比db/db小鼠,KK-Ay小鼠的ACR个体差异小,采尿后动物死亡少,irbesartan治疗后GLU、TG、UCFP均有显著改善。

摘要:传统啮齿类实验动物在实验教学中存在成本高、周期长等限制。斑马鱼作为一种新兴的模式生物,以其繁殖快、发育迅速、成本低等优势,在生命科学研究中备受青睐。然而,斑马鱼在实验动物学教学中的应用仍有待深入开发。本研究以《医学实验动物学及技术》课程为例,将斑马鱼引入“组织切片技术”和“免疫实验技术”两个实验模块,旨在探索斑马鱼在实验动物学教学中的应用潜力。通过详细介绍实验操作流程、实验设计和教学内容,旨在为本科生提供一个高效、低成本,且具有较高实践性的实验教学平台。实验 结果表明,斑马鱼在实验教学中具有显著优势,不仅可以降低实验成本,缩短实验周期,而且能够让学生更直观地掌握实验技术,提高学习兴趣。

摘要:白血病是一种源于造血系统的恶性肿瘤,其发病率逐年增加。尽管化疗和造血干细胞移植等传统治疗方法在一定程度上改善了患者的生存率,但仍存在副作用严重、药物耐受及高复发率等问题。近年来,研究发现肠道菌群及其代谢物在白血病的发生、发展及并发症中发挥着重要作用。肠道菌群失衡可导致免疫功能下降和炎症反应加剧,是推动疾病进展的关键因素之一。短链脂肪酸等代谢物通过增强免疫功能和改善肠道屏障修复白血病患者的预后,而硫化氢和胆汁酸等代谢物则在调节肿瘤细胞凋亡和免疫平衡中表现出潜在的抗肿瘤作用。此外,中医药通过调节肠道菌群结构和代谢物显示出缓解白血病化疗副作用的巨大潜力。本文综述了肠道菌群及其代谢物在白血病发生发展及并发症中的作用,并探讨了调节菌群的治疗策略,包括粪便菌群移植、益生菌及中医药干预,进一步为白血病治疗和预后改善提供参考。

摘要:慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)是由各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍的一组临床综合征,治疗费用高、预后差。作为基因表达的重要调节因子,研究表明表观遗传修饰对基因表达和细胞功能的影响在CKD的发生发展中起关键的调控作用。同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是体内常见的一种含有氨基酸的硫醇基团,高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia,HHcy)作为终末期肾脏疾病发病率和死亡率的独立预测因子,涉及脏器多,危害性大。本文介绍了HHcy与慢性肾功能损伤关系,进一步对表观遗传修饰在同型半胱氨酸介导慢性肾功能损伤机制中调控作用的研究进展进行综述,旨在更加深入的了解慢性肾脏疾病发生发展的过程及其机制,为慢性肾脏疾病的研究提供一定新的思路和理论基础。

摘要:肉桂(Cinnamomum cassia Presl)属樟科常绿乔木植物,以其树皮入药,其主要含有挥发油、多酚类、多糖类、黄酮类、黄烷醇类等化学成分,具有抑制神经炎症反应、氧化应激、神经细胞凋亡,神经保护以及改善脑缺血再灌注等作用。随着现代医学的进步,发现该药在防治中枢神经系统疾病(central nervous system diseases,CNSD)方面具有独特的优势,肉桂及其制剂已广泛应用于阿尔茨海默病和帕金森病等神经退行性疾病的治疗,因此,肉桂治疗CNSD成为热点研究方向之一。目前,肉桂在神经系统中的作用机制尚未有全面的概括与总结,因此,本文通过总结近年来国内外肉桂治疗CNSD实验研究进展进行归纳,为肉桂的临床研究及开发利用提供循证医学证据。

摘要:阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种与年龄相关的神经退行性疾病,临床主要表现为进行性认知障碍以及记忆、语言功能的减退等。随着我国人口老龄化进程的加快,我国患AD的人数也在不断增加,而AD的确切发病机制尚不明确,目前治疗策略也仅是对症治疗为主。动物模型是临床前研究的重要工具,用于探索疾病的分子机制、行为功能和治疗策略。未来对AD的机制研究和药物开发需要建立与临床病理特征相符合的动物模型。本文主要对近年来研究报道中常用的AD动物模型进行总结,并详细阐述相关AD动物模型的品系、年龄、造模方式、造模剂量、中药组分研究及药效机制,以期为未来建立新的动物模型或深入探讨中药中各组分的具体药理活性、靶点、代谢途径、临床应用等提供一些参考。

摘要:铜(Cu)是一种人体必需的微量元素,以氧化和还原形式参与多种代谢和信号传导过程。它与肿瘤发展的多个方面紧密相关,铜稳态的变化对肿瘤细胞的生长、转移、肿瘤微环境的调节、氧化应激反应、细胞信号传递,以及肿瘤细胞逃避免疫监视等过程都有显著影响。在肿瘤细胞中,铜代谢主要通过调节程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)的表达来促进肿瘤的免疫逃逸。鉴于铜在肿瘤免疫中的重要作用,调节铜代谢已成为一种有前景的治疗策略。本文综述了铜在人体内的调控机制,探讨了铜代谢紊乱如何影响肿瘤的发生、发展,以及免疫和肿瘤微环境,同时,还探讨了将铜作为肿瘤免疫治疗靶点的研究价值。

摘要:骨肉瘤(osteosarcoma, OS)是骨组织常见的原发性恶性肿瘤,具有较高的病死率、致残率、转移率和复发率,其发病机制复杂,严重影响患者的生活质量,给家庭和社会都带来了巨大的经济负担。中药具有“多靶点、多成分、多途径”的特点,近年来,大量动物或细胞模型实验研究发现,OS发生进展的作用机制与神经源性位点缺口同源蛋白(neurogenic locus notch homolog protein,Notch)、有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)、分泌型糖蛋白(Wingless/Integrated,Wnt)/β-连环蛋白(beta-catenin,βcatenin)、磷酸酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)/蛋白质激酶B(protein kinase B,AKT)、刺猬因子(Hedgehog,Hh)、核转录因子(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)/果蝇抗蜕皮蛋白同源物(small mothers against decapentaplegic,Smad)、信号转导及转录激活因子(signal transdueer and activator of tanseription,STAT)通路紧密相关,中药可通过干预以上相关信号通路从而影响细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和自噬等生物学过程发挥抗肿瘤的作用。本研究以细胞信号通路为基础,阐述了上述信号通路在OS中的作用,并对近些年中药干预上述信号通路防治OS的国内外研究现状进行总结,旨在为今后深入研究中药治疗OS提供参考依据,以期为临床治疗OS提供新思路。

摘要:咽喉反流性疾病(laryngopharyngeal reflux disease, LPRD)是一种在上呼吸道和上消化道共同发生的疾病。发病机制复杂,尚缺乏有效治疗办法,合理的动物模型和标准的评价方法对探究其发病机制和开发新型治疗药物尤为重要。新西兰兔是本病常用的造模动物,球囊扩张术是常用的造模方法。本病较为标准的评价方法包括症状观察评价、影像学评价及pH监测等。通过查阅国内外文献,对咽喉反流的动物模型和评价指标进行了详尽地综述,以期对今后的研究提供参考。

摘要:肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAM)作为近几年肿瘤微环境研究中的热点之一,为实现其功能上的不同作用,巨噬细胞经历了一系列表型的极化,通常存在两个不同的亚群,M1型巨噬细胞具有促炎和杀肿瘤作用,而M2型巨噬细胞具有抗炎和促肿瘤作用。其中,TAM主要表现出的M2极化已被发现与多种癌症的不良预后相关,并表现出对多种恶性肿瘤的支持特性。胃癌患者早诊率低,疾病分期晚,预后也较差,具有易于复发转移的生物学行为特点。目前药物的耐药性和毒副作用极大限制了胃癌治疗的应用和疗效,因而寻找新的治疗靶点或药物至关重要。本文总结了TAM在胃癌发生、发展及耐药过程中所取得的研究进展,为胃癌患者的临床治疗和预后分析提供新的见解。