摘要: 目的 基于网络药理学、分子对接及体外实验探究熊果酸抗矽肺纤维化的作用机制。 方法通过 GeneCards、PubChem 等数据库获取熊果酸作用靶点;检索疾病相关数据库(GeneCards、OMIM)获得矽肺纤维化及上皮间质转化(EMT)相关靶点。 利用微生信平台筛选交集靶点,通过 STRING 数据库和 Cytoscape构建蛋白互作网络,筛选核心靶点;采用 David 数据库进行 GO 和 KEGG 富集分析;运用 AutoDock 进行分子对接验证。 通过 beas-2B 细胞实验验证关键靶点。 结果 获得熊果酸作用靶点 179 个,矽肺纤维化及 EMT 相关靶点分别为 8023 个和 6809 个,交集靶点 133 个。 筛选出 AKT、STAT3、MMP9 等 9 个核心靶点,其中 MMP9 和AKT 在 PPI 网络中具有最高连接度。 分子对接显示熊果酸与 MMP9(结合能-8. 4 kJ/ mol)、AKT(结合能-7. 9kJ/ mol)具有强结合活性。 KEGG 分析提示 PI3K-AKT 信号通路为关键调控通路。 体外实验表明,熊果酸显著抑制 SiO2 诱导的细胞活力下降(CCK8);降低 p-AKT 表达(Western blot,P<0. 05);下调纤维化标志物 α-SMA和间质标志 Vimentin 表达,同时上调上皮标志物 E-cadherin 表达(免疫荧光/ Western blot,P<0. 05)。 结论熊果酸可能通过抑制 AKT 磷酸化及 MMP9 表达,调控 EMT 进程,从而发挥抗矽肺纤维化作用。

摘要:b> 目的 探究异鼠李素防治肝纤维化的作用机制及核心靶点。 方法 整合生物信息学数据,通过差异基因分析、加权基因共表达网络(WGCNA)挖掘肝纤维化相关靶点,结合异鼠李素作用靶点筛选关键交集基因;利用机器学习优化核心靶点,并通过孟德尔随机化验证其因果关联;进一步通过分子对接、动力学模拟评估靶点功能。 结果 筛选出肝纤维化与异鼠李素交互靶点 113 个,主要富集于磷脂酰肌醇-3 激酶/ 蛋白激酶 B( PI3K-AKT)、肿瘤坏死因子( TNF) 等信号通路;机器学习联合孟德尔随机化锁定芳香烃受体(AHR)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(CASP3)、丝裂原激活蛋白激酶 14(MAPK14)为关键靶点;多数据集验证显示其表达一致且诊断效能显著(曲线下面积>0. 7);分子模拟证实异鼠李素与靶点的结合稳定(结合能<-7. 0 kcal / mol)。 结论 异鼠李素通过靶向 AHR、CASP3 和 MAPK14 调控炎症、凋亡及代谢通路,从而抑制肝纤维化,为中医药抗纤维化机制研究提供了新视角。

摘要: 目的 探讨玉朗伞查尔酮(YLSC)对血管紧张素 II(Ang II)诱导的 H9c2 心肌细胞损伤的保护作用及可能机制。 方法 将 H9c2 心肌细胞分为空白对照组、模型组、YLSC 低、中、高剂量组,YLSC 干预后,以浓度为 1 μmol / L 的 Ang II 诱导细胞损伤模型。 细胞计数法(CCK-8)检测细胞活力,单丹磺酰尸胺染色法(MDC)检测细胞自噬体的形成,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平,Hoechst 33342 染色法检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测心肌细胞三磷酸腺苷(ATP)含量,逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测 Bcl2-腺病毒 E1B 19 kDa 相互作用蛋白 3(Bnip-3)及自噬相关蛋白5(Atg5) 水平,蛋白免疫印迹法( Western blot) 检测自噬标记蛋白 p62、Beclin1 及 LC3II/ LC3I 表达。 结果YLSC 能减轻 Ang II 诱导的 H9c2 心肌细胞损伤,CCK-8 检测提示 YLSC 能提高心肌细胞的活力(P<0. 05 或 P<0. 01),MDC 染色法提示 YLSC 能促使自噬体形成,DCFH-DA 荧光探针法检测结果显示 YLSC 能减少 ROS 的生成(P<0. 01),Hoechst 33342 染色法检测结果显示 YLSC 能减少细胞凋亡(P<0. 01),ELISA 检测结果显示YLSC 能提高细胞 ATP 水平(P<0. 05 或 P<0. 01),RT-PCR 检测结果显示 YLSC 能促进 Bnip-3 和 Atg5 的基因表达(P<0. 05 或 P<0. 01),Western blot 检测结果显示 YLSC 能降低 p62 的表达并提高 Beclin1 及 LC3II/ LC3I的表达(P<0. 05 或 P<0. 01)。 结论 YLSC 能有效抑制 Ang II 诱导的 H9c2 心肌细胞损伤及凋亡,其机制可能与启动心肌自噬程序、激活自噬相关因子表达以及清除凋亡细胞等有关。

摘要: 目的 探讨小干扰 RNA(siRNA)靶向抑制骨桥蛋白(OPN)表达后对肝癌细胞 Warburg 效应的影响及其作用机制。 方法 将靶向 OPN 的 siRNA( si-OPN) 及阴性对照序列( si-NC) 分别转染肝癌细胞HepG2 和 SK-HEP-1。 采用 2-NBDG 荧光探针法检测肝癌细胞的葡萄糖摄取能力,乳酸试剂盒检测肝癌细胞乳酸生成情况。 采用 RT-qPCR 及 Western blot 检测肝癌细胞中糖酵解相关的葡萄糖转运蛋白(GLUT1)、己糖激酶 2(HK2)及乳酸脱氢酶 A(LDHA)的表达变化。 在 HepG2 和 SK-HEP-1 细胞中沉默半乳糖凝集素 3 结合蛋白(LGALS3BP)表达以及干扰 OPN 后再过表达 LGALS3BP。 Western blot 分别检测肝癌细胞中 LGALS3BP及糖酵解相关基因 GLUT1、HK2 及 LDHA 的表达变化,2-NBDG 法检测细胞葡萄糖摄取能力,乳酸试剂盒检测乳酸生成情况。 结果 与未转染(Control)组和 si-NC 组相比,干扰 OPN(si-OPN)组的 HepG2 和 SK-HEP-1 细胞对葡萄糖的摄取量及乳酸生成量均显著降低(P<0. 05),同时 GLUT1、HK2 及 LDHA 基因在 mRNA 及蛋白水平的表达均显著降低(P<0. 05)。 HepG2 和 SK-HEP-1 细胞中干扰 OPN 后 LGALS3BP 的蛋白表达下调(P<0. 05),干扰 LGALS3BP 后葡萄糖摄取量和乳酸产量的水平显著降低(P<0. 05),GLUT1、HK2 及 LDHA 的蛋白表达显著降低(P<0. 05)。 干扰 OPN 的 HepG2 和 SK-HEP-1 细胞中过表达 LGALS3BP 后发现受抑制的糖酵解代谢相关指标均得到恢复,表明 OPN 通过 LGALS3BP 促进肝癌细胞糖酵解代谢。 结论 OPN 通过上调LGALS3BP 促进糖酵解相关基因的表达,从而增强肝癌细胞的 Warburg 效应。

摘要: 目的 研究聚焦于张力蛋白 1(TNS1)和 miR-574-5p 在心脏骤停中的调控关系及其临床意义,验证靶向抑制 miR-574-5p 的治疗潜能。 方法 构建氧糖剥夺/ 复氧(OGD/ R)心肌细胞模型和小鼠窒息性心脏骤停/ 心肺复苏(ACA/ CPR)模型。 采用 RT-qPCR 检测 miR-574-5p 和 TNS1 的表达水平;使用 Wester blot 检测心肌细胞中 TNS1 蛋白的表达水平;通过双荧光素酶报告基因实验验证 miR-574-5p 与 TNS1 的靶向关系;应用 CCK-8 检测细胞活力;采用流式细胞术检测细胞凋亡;通过 ELISA 法检测血清中心肌损伤标志物 cTnI 和氧化应激标志物 MDA、4-HNE 的水平;使用血流动力学监测系统评估心功能指标 dp / dtmin 和 dp / dtmax;通过超声心动图测定 LVEF 和 LVFS 等心功能参数。 结果 OGD/ R 处理可显著上调心肌细胞中 miR-574-5p 的表达并抑制 TNS1 mRNA 和蛋白的表达(P<0. 05)。 抑制 miR-574-5p 可改善心肌细胞存活率并减轻氧化应激损伤(P<0. 05)。 在 ACA/ CPR 模型中,miR-574-5p antagomir 组显著改善心功能指标(P<0. 05),降低心肌损伤和氧化应激标志物水平(P<0. 05),同时逆转了心肌组织中 miR-574-5p 上调和 TNS1 下调的表达模式(P<0. 05)。 结论 本研究证实靶向抑制 miR-574-5p 可通过上调 TNS1 的表达改善心功能,为心脏骤停后的心肌保护提供了新的治疗靶点。

摘要: 目的 探讨乔松素(Pin)对小鼠黑色素瘤细胞 B16 凋亡、迁移的影响及其与 DAAM2 / Wnt / β-catenin 信号轴的关系。 方法 体外通过 CCK8 法筛选抑制小鼠黑色素瘤细胞 B16 活力的中药单体;通过流式细胞术和划痕实验检测筛选出的 Pin 对黑色素瘤细胞 B16 凋亡和迁移的影响;利用 RNA-seq 测序结合 GEPIA数据库分析 Pin 可能作用的核心基因,并采用实时荧光定量 PCR( qPCR)和 Western blot 法验证 DAAM2 和Wnt / β-catenin 信号通路相关蛋白 Axin2、p-GSK3β、p-β-catenin 的表达水平。 通过转染过表达 DAAM2 质粒进行回复实验。 体内建立小鼠黑色素瘤模型,给予 Pin 低、高剂量(10 mg / kg、30 mg / kg)灌胃干预,观察小鼠黑色素瘤的生长情况。 Western blot 检测 Pin 对黑色素瘤组织中 DAAM2、Axin2、β-catenin、p-GSK3β 表达的影响,进一步明确 Pin 对小鼠黑色素瘤进程的影响。 结果 Pin 显著促进黑色素瘤细胞 B16 的凋亡(P<0. 001),抑制其迁移速率(P<0. 01,P<0. 001);RNA-seq 和 GEPIA 分析提示 DAAM2 为关键靶点。 qPCR 和 Western blot结果显示 Pin 能够显著降低 DAAM2 的 mRNA 和蛋白表达(P<0. 05,P<0. 01,P<0. 001),并下调 Wnt / β-catenin信号通路相关蛋白 p-GSK3β、p-β-catenin 和 Axin2 的表达水平(P<0. 001)。 体内实验表明,高剂量 Pin 可明显抑制小鼠黑色素瘤的生长和瘤重,同时降低瘤组织中 DAAM2、Axin2、β-catenin、p-GSK3β 的表达(P<0. 05,P<0. 01),DAAM2 过表达可逆转 Pin 对 DAAM2 / Wnt / β-catenin 信号轴的作用。 结论 Pin 可通过下调 DAAM2 /Wnt / β-catenin 信号轴,促进黑色素瘤细胞凋亡、抑制其迁移,并抑制小鼠体内黑色素瘤生长。

摘要: 目的 建立食蟹猴 FABP4 基因 mRNA 表达水平检测方法。 方法 根据脂肪 FABP4 基因mRNA 序列设计实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)引物 6 对;活体采集食蟹猴脂肪组织;提取组织总 RNA,并逆转录为 cDNA;采用所设计的 6 对引物进行 RT-qPCR 检测,根据扩增曲线、熔解峰,挑选出检测最灵敏、无非特异性扩增的引物;以 10P>0、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4 倍稀释 cDNA,构建基因表达的标准曲线;设置食蟹猴青年组和老年组两个组别,验证食蟹猴脂肪 FABP4 基因表达的 RT-qPCR 检测方法。 结果 筛选出了检测灵敏度最高的一对引物,建立了食蟹猴脂肪组织 FABP4 基因表达水平 RT-qPCR 检测方法;老年组食蟹脂肪 FABP4 基因相对表达量高于青年组。 结论 成功建立了检测食蟹猴 FABP4 基因转录水平的 RT-qPCR方法。

摘要: 目的 在不同条件下建立小鼠脑/ 肺水肿模型,通过 3 种方法计算含水量,并进行比较研究。 方法 雄性 BALB/ c 小鼠 50 只,随机分为空白组(Control)和 4 个实验组:6000 m/ 48 h 组、6000 m/ 72 h 组、8000 m/ 48 h 组、8000 m/ 72 h 组,每组 10 只。 记录各组小鼠实验前体质量,除 Control 组外,其余各组置于模拟高原环境动物实验舱内,分别在 6000 m 或 8000 m 海拔高度,暴露 48 h 或 72 h。 暴露时间结束后,称量体质量、采集并计算实验后肺湿重、脑湿重、肺干重、脑干重等,采用 3 种不同方法计算模型含水量,并进行差异性分析,并通过 HE 染色观察脑部和肺部的病理学变化。 结果 除 Control 组外,各实验组小鼠体质量均显著下降(P<0. 01),且相同海拔暴露 72 h 体质量下降最为明显。 对肺水肿模型进行分析:6000 m / 48 h 组的肺含水量 3 种计算方法结果一致,均与 Control 组无显著差异(P>0. 05),病理分析表明 6000 m / 48 h 组肺部有轻微水肿;6000 m / 72 h、8000 m / 48 h、8000 m / 72 h 这 3 组的肺含水量使用方法2 或方法 3 计算结果一致,均显著高于 Control 组(P<0. 01),同时病理分析表明这 3 组肺部存在明显水肿,但这 3 组的肺含水量通过方法1 计算结果与 Control 组均无显著差异(P>0. 05)。 对脑水肿模型进行分析:通过方法 1 进行计算时,各实验组的脑含水量均显著低于 Control 组(P<0. 01);方法 2 和方法3 的计算结果完全一致,各实验组的脑含水量均显著高于 Control 组(P<0. 01);病理分析表明 4 个实验组的脑部均存在明显水肿。 结论 方法1 存在较严重误差,方法2 和方法 3 计算结果相近,均引入体质量变化的校正能力,建议作为高原脑 / 肺水肿模型的标准计算方法。

摘要:采用调研及数据分析的方式,探讨证照分离改革以来浙江省实验动物行业的现状。 研究发现,改革后行业准入门槛降低,市场主体数量增加,但监管体系面临新的挑战。 实验动物生产和使用规模扩大,质量有所提升,但仍存在标准化不足的问题。 科研创新能力得到提升,但区域发展不均衡。 针对这些问题,提出了完善监管体系、加强行业自律、提升科研创新能力等对策建议,以促进浙江省实验动物行业的健康可持续发展。

摘要:人工智能(AI)技术在实验动物科学教学中已得到了广泛应用。 本文分析了基于 AI 的虚拟仿真技术在国内外实验动物科学教学中的实践现状和 AI 在实验动物科学教学互动中的实践现状、AI 在实验动物模型教学中的实践现状、AI 在实验动物科学教学中的利弊等,列举了常用的 AI 工具。 可以预期,AI 技术将在未来实验动物科学教学中发挥重要作用。

摘要:实验动物设施在医院科研工作中具有十分重要的作用,其建设标准与规范、设计原则与功能布局、设备配置与环境控制,以及运行管理、质量控制、安全管理、人员培训等方面均遵循统一的标准和要求,但由于实验动物设施的建设是一项复杂的系统性工程,每个科研机构和医院在设施的设计理念、用途、地理位置、施工要求、人员组成等方面存在明显差异,在实验动物设施的具体建设和运行实践中,遇到的问题也各不相同。 本文围绕国家心血管病中心华中分中心实验动物设施的建设与运行实践展开论述,总结本单位在实验动物设施的建设与运行经验,为医院系统实验动物设施的建设和运行提供理论指导和实践参考。

摘要:阴茎海绵体原代细胞分离与培养是研究勃起功能障碍(ED)病理机制的关键技术手段之一。本文详细综述了阴茎海绵体中平滑肌细胞(CSMCs)、内皮细胞(CECs)、周细胞(CPs)和成纤维细胞(CFs)等主要细胞类型的分离与培养方法,包括酶消化法、组织贴壁法、免疫磁珠法及基质胶诱导法等,并对各方法的优、缺点进行比较,同时,总结不同类型原代细胞的鉴定技术。 本文系统归纳细胞培养和鉴定方法,为深入研究阴茎海绵体细胞在 ED 的发生发展及治疗中的作用提供了一定的技术支持和参考。

摘要:急性肾损伤(AKI)是一种常见的临床综合征,其主要特征为短期内肾功能急剧下降并伴随尿量异常和氮质血症等多种症状。 AKI 的病理机制极其复杂,主要涉及炎症反应、氧化应激及细胞死亡等过程。近年来全球范围内 AKI 发病率逐年升高,已然成为急需解决的公共卫生难题。 近期研究发现,巨噬细胞通过动态调控铁代谢,在 AKI 的进展与修复过程中发挥着双重作用。 本文系统阐述了巨噬细胞铁代谢失衡对 AKI进展的影响机制:铁过载通过诱导 M1 型极化加剧炎症反应,促进脂质过氧化及铁死亡;而铁限制则可能通过激活 Nrf2 等通路增强抗氧化能力,推动 M2 型极化促进肾组织修复。 基于以上机制,本文进一步评述了靶向铁代谢的新型治疗策略,如铁调素抑制剂、铁螯合剂和靶向巨噬细胞纳米载体技术,旨在重塑铁稳态并促进巨噬细胞表型向修复型转化。 这些研究发现为理解 AKI 的发病机制提供了新的视角,同时也为研发 AKI 新型治疗靶点和策略提供了理论基础。

摘要:滥用成瘾物质将会导致一系列的法律问题和公共卫生问题,给个人、家庭和社会带来极大的危害。 成瘾物质通过影响大脑神经递质释放和神经可塑性变化,导致行为改变和认知功能障碍。 重复经颅磁刺激(rTMS)是治疗物质使用障碍的一种非侵入性神经调节方法,可以改善物质使用障碍患者的渴求行为和认知障碍。 本文通过梳理近年来重复经颅磁刺激在常见物质使用障碍治疗中的研究成果,系统综述了重复经颅磁刺激在物质使用障碍中的巨大潜力,以期为物质使用障碍的治疗提供新的思路。

摘要:缺血性脑卒中是常见的重大慢性疾病之一。 HIF-1α/ VEGF 信号通路是介导血管生成的重要通路。 缺血性脑卒中发生后,HIF-1α/ VEGF 可通过调节血管新生、神经发生、氧化应激、炎性反应和细胞自噬以发挥治疗作用,其作用机制具有双相性特点。 中医药可以靶向调控 HIF-1α/ VEGF 通路,进而改善氧化应激、炎性反应、细胞自噬及凋亡,促进缺血区血管生成,治疗缺血性脑卒中。 故本文以 HIF-1α/ VEGF 信号通路为切入点,系统阐述了 HIF-1α/ VEGF 信号通路在缺血性脑卒中中的作用机制及特点,并总结中医药靶向干预HIF-1α/ VEGF 信号通路治疗缺血性脑卒中的研究进展,以期为本病的临床治疗提供依据和参考。