摘要: 目的 探讨环孢素 A(CsA)诱导的肾纤维化(RF)中去整合素金属蛋白酶 17(ADAM17)对于内质网应激(ERS)的调控机制,挖掘 RF 进程的新靶点。 方法 CsA 灌胃建立 SD 大鼠 RF 模型,采用质粒转染技术和 siRNA 技术,将动物体内 ADAM17 过表达或敲低。 测定大鼠体质量、尿蛋白/ 肌酐比值(UPCR)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCR)、胱抑素 C(Cys-C)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、ADAM17 的变化;HE 染色、Masson 染色观察肾脏组织病理改变;透射电镜观察肾脏组织超微结构变化;免疫荧光法检测 ADAM17、葡萄糖调节蛋白 78(GRP78)共表达;RT-qPCR 检测肾脏组织 TGF-β1、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白 α1 链(COL1A1)、ADAM17、GRP78、肌醇需要酶 1( IRE1)、激活转录因子 6( ATF6) 的 mRNA 表达;Western blot 检测 ADAM17、Smad3、TGF-β1、α-SMA、COL1A1、GRP78 蛋白的表达。 结果 模型 1 组大鼠较空白对照 1 组体质量下降(P<0. 01),UPCR、血清肾功能指标(SCR、BUN、Cys-C)极显著升高(P<0. 0001);形态学检测肾脏组织出现肾间质纤维化等病理变化;RF 相关指标 TGF-β1、Smad3 表达上调(P<0. 001),并伴随着ADAM17、GRP78 的异常表达(P<0. 01)。 过表达 ADAM17(P<0. 0001),大鼠同样出现体质量下降、UPCR 升高、血清肾功能指标升高(P<0. 01)以及 RF 的病理变化;RF 相关指标 TGF-β1、Smad3、α-SMA、COL1A1 均不同程度升高(P<0. 05)。 同时,ERS 相关因子 GRP78、ATF6、PERK 表达不同程度上调(P<0. 05);反之,敲低模型组大鼠的 ADAM17 相关指标的异常表达均不同程度减轻(P<0. 05)。 结论 ADAM17 显著促进纤维化进程,ADAM17 调控 ERS 的异常表达可能是其促纤维化进程的重要机制。

摘要: 目的 通过 LC/ MS 分析技术和网络药理学的综合策略,结合实验验证探讨补肾壮骨汤治疗 2型糖尿病性骨质疏松(T2DOP)的有效成分和作用机制。 方法 采用 UPLC-Q-Orbitrap-MS 法对补肾壮骨汤中的有效化学成分进行分析鉴定,检索数据库中 T2DOP 与铁死亡的相关基因,取交集得到有效成分通过调控铁死亡途径治疗 T2DOP 的潜在靶点。 腹腔注射链脲佐菌素联合高糖高脂喂养诱导的 T2DOP 大鼠模型,模型构建成功后进行补肾壮骨汤灌胃 8 周,检测体质量、血糖及糖化血红蛋白,取材后进行 Micro CT 以获取骨形态学变化,试剂盒检测总铁离子水平、SOD 及 MDA 水平。 Western blot 法检测骨组织 Nrf2 / HO-1 信号及铁死亡相关蛋白表达。 结果 补肾壮骨汤中药入血化合物共预测到 46 种已识别化合物的 848 个靶点。 通过比对GeneCards、CTD 数据库和 FerrDb V2 数据库最终获得 81 个补肾壮骨汤可能通过调控铁死亡抗 T2DOP 的潜在靶点。 PPI 网络分析 SIRT1、MTOR、STAT3、Nrf2、SRC、EGFR、IL-6、MAPK3、IL-1B、PPARG、ALB 等节点可能是补肾壮骨汤治疗 T2DOP 的重要靶点。 KEGG 通路富集分析得到关于交集靶基因的 134 条信号通路,主要通路为代谢途径、脂质与动脉粥样硬化、糖尿病并发症中的铁死亡信号通路等。 与对照组相比,模型组大鼠体质量增长缓慢,血糖及糖化血红蛋白水平升高,骨小梁发生破坏,骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度及密度下降,骨小梁分离度升高,骨组织总铁离子及 MDA 水平上升,SOD 活力下降,Nrf2、HO-1 及铁死亡相关蛋白表达上升(P<0. 05);与模型组相比,补肾壮骨汤干预后大鼠体质量增长有所上升,血糖及糖化血红蛋白水平有所下降,骨小梁破坏减轻,骨密度、骨体积分数、骨小梁数目及密度增加,骨组织总铁离子及 MDA 水平下降,SOD 活力有所提升,Nrf2、HO-1 及铁死亡相关蛋白表达下降(P<0. 05)。 结论 补肾壮骨汤治疗 T2DOP 具有多成分、多靶点、多途径的特点,体内实验结果显示补肾壮骨汤可通过调控 Nrf2 / HO-1 信号通路,抑制氧化应激和铁死亡防治 T2DOP。

摘要: 目的 探究超声微泡(UM)介导微小 RNA-545-3p(miR-545-3p)调节 E2F 转录因子 3(E2F3)信号通路对甲状腺癌(TC)细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法 用 RT-qPCR 法检测甲状腺乳头状癌(PTC)细胞系(TPC-1、K1、TTA1 细胞)和 TC 组织中 miR-545-3p、E2F3 的 mRNA 水平。 双荧光素酶实验检测 miR-545-3p与 E2F3 的关系。 用超声技术制备微泡,将 TPC-1 细胞分为 Control 组、miR-NC 组、miR-545-3p-mimics 组、UM+miR-545-3p-mimics 组、UM+miR-545-3p-mimics+pcDNA 组、UM+miR-545-3p-mimics+E2F3 组;分别检测超声微泡介导的 miR-545-3p 靶向 E2F3 对 PTC 细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的影响。 免疫印迹检测相关蛋白表达。 移植瘤实验检测 miR-545-3p 对肿瘤生长和 E2F3 表达的影响。 结果 TC 组织及 TPC-1 细胞中 E2F3 mRNA 表达水平升高,miR-545-3p 表达水平降低(P<0. 05)。 Starbase 数据库在线预测发现,miR-545-3p 与 E2F3 间存在靶向结合位点。 与 miR-NC 组相比,miR-545-3p-mimics 组细胞克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数目减少, E2F3、 CDK1、MMP-2、MMP-9、N-Cadherin、Vimentin 表达水平降低, miR-545-3p、 ECadherin 表达水平升高(P<0. 05);与 miR-545-3p-mimics 组相比,UM+miR-545-3p-mimics 组克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数目下降,E2F3、CDK1、MMP-2、MMP-9、N-Cadherin、Vimentin 表达水平降低,miR-545-3p、ECadherin 表达水平升高(P<0. 05);与UM+miR-545-3p-mimics+pcDNA 组相比,UM+miR-545-3p-mimics+E2F3组克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数目升高,E2F3、CDK1、MMP-2、MMP-9、N-Cadherin、Vimentin 表达水平升高,E-Cadherin 表达水平降低(P<0. 05)。 miR-545-3p-mimics 组肿瘤体积比 miR-NC 组小,质量比 miR-NC 组低,E2F3 表达水平比 miR-NC 组低,miR-545-3p 水平比 miR-NC 组高(P<0. 05);UM+miR-545-3p-mimics 组肿瘤体积比 miR-545-3p-mimics 组小,质量比 miR-545-3p-mimics 组低,E2F3 表达水平比 miR-545-3p-mimics 组低,miR-545-3p 表达水平比 miR-545-3p-mimics 组高(P<0. 05)。 结论 UM 介导 miR-545-3p 靶向调控 E2F3信号通路抑制 PTC 细胞增殖、迁移、侵袭和 EMT。

摘要: 目的 探讨天麻素(GAS)对牙周炎大鼠炎性损伤及对 AMP 依赖的蛋白激酶/ 核因子 κB/ 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3(AMPK/ NF-κB/ NLRP3)通路的影响。 方法 构建牙周炎大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为模型(Model)组、天麻素低、中、高剂量(GAS-L、GAS-M、GAS-H)组、天麻素高剂量+通路抑制剂 Compound C(GAS-H+CC)组,每组 18 只,另取 18 只健康正常大鼠作为对照(Control)组;评定大鼠牙龈指数和牙龈出血指数;显微计算机断层扫描仪(Micro-CT) 测定牙周炎诱导区域釉牙骨质界和牙槽骨嵴顶(CEJ-ABC)距离及骨密度;酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测血清及牙周组织炎性因子水平;苏木精-伊红(HE)染色检测牙周组织病理损伤;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测牙周组织破骨细胞数量;免疫组化检测牙周组织骨代谢相关蛋白表达;免疫印迹(Westem blot)检测 AMPK/ NF-κB/ NLRP3 通路相关蛋白表达。 结果 GAS-L、GAS-M、GAS-H 组较 Model 组牙周组织病理损伤减轻,骨吸收陷窝减少,炎性细胞浸润减轻,牙龈指数、牙龈出血指数、CEJ-ABC 距离、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6 水平、组织损伤评分及破骨细胞数量、核因子 κB 受体活化因子配体(RANKL)、p-NF-κB p65 / NF-κB p65、NLRP3 表达降低(P<0. 05,P<0. 01),骨密度、骨保护素(OPG)、骨钙素(OCN)、p-AMPK/ AMPK 表达升高(P<0. 05,P<0. 01);GAS-H+CC 组较 GAS-H 组牙周组织病理损伤加重,牙龈指数、牙龈出血指数、CEJ-ABC 距离、TNF-α、IL-6 水平、组织损伤评分及破骨细胞数量、RANKL、p-NF-κB p65 / NF-κB p65、NLRP3 表达升高,骨密度、OPG、OCN、p-AMPK/ AMPK表达降低(均 P<0. 05)。 结论 GAS 可改善牙周炎大鼠炎性损伤,与调控 AMPK/ NF-κB/ NLRP3 通路相关。

摘要: 目的 基于 Wnt / β-连环蛋白(β-catenin)通路探究槲皮素(QCT)对腹膜透析(PD)大鼠腹膜纤维化(PF)的影响及机制。 方法 构建 PD 大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为 LiCl-N 组(0 mg / kg)、LiCl-L组(30 mg / kg)、LiCl-M 组(60 mg / kg)、LiCl-H 组(90 mg / kg)、PD 组、QCT-L 组(17. 5 mg / kg)、QCT-H 组(35 mg /kg)、QCT-H+LiCl-M 组(35 mg / kg 的 QCT+60 mg / kg LiCl)。 随机选取 12 只大鼠为 Ctrl 组,Ctrl 组和 PD 组在同一时间段、相同部位灌胃和腹腔注射等量的 0. 9%氯化钠溶液,每天 1 次,持续 4 周;腹膜平衡试验检测腹膜功能;HE 染色观察腹膜组织变化;Masson 染色观察腹膜组织纤维化;ELISA 法测定炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6);IHC 检测大鼠 α-SMA、CoL-1、E-cadherin 蛋白表达;Western blot 检测大鼠 Wnt3a、LRP5、LEF-1、GSK-3β、β-catenin 蛋白表达水平。 结果 与 LiCl-N 组相比,LiCl-L 组 Scr、BUN、MTG、UF、Wnt3a、β-catenin 蛋白表达无显著性差异(P>0. 05);LiCl-M 组 Scr、BUN、MTG、UF 无显著性差异(P>0. 05),Wnt3a、β-catenin 蛋白表达显著升高(P<0. 05);LiCl-H 组 Scr、BUN、MTG、Wnt3a、β-catenin 蛋白表达显著升高,UF 显著下降(P<0. 05)。 因此选择 60 mg / kg 作为 LiCl 浓度。 与 Ctrl 组相比,PD 组大鼠腹膜组织间皮细胞脱落,炎症细胞数量、胶原纤维沉积相对面积、腹膜厚度、血清 Scr、BUN 水平、MTG、腹膜组织 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平、α-SMA、CoL-1、Wnt3a、LRP5、LEF-1、β-catenin 蛋白表达水平升高(P<0. 05),UF、E-cadherin、GSK-3β 蛋白表达水平降低(P<0. 05);与 PD 组相比,QCT-L 组、QCT-H 组腹膜组织有少量间皮细胞脱落,炎症细胞数量、胶原纤维沉积相对面积、腹膜厚度、血清 Scr、BUN 水平、MTG、腹膜组织 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平、α-SMA、CoL-1、Wnt3a、LRP5、LEF-1、β-catenin 蛋白表达水平降低(P< 0. 05),UF、E-cadherin、GSK-3β 蛋白表达水平升高(P<0. 05);与 QCT-H 组相比,QCT-H+LiCl-M 组腹膜组织破坏程度明显加重,炎症细胞数量、胶原纤维沉积相对面积、腹膜厚度、血清Scr、BUN 水平、MTG、腹膜组织 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平、α-SMA、CoL-1、Wnt3a、LRP5、LEF-1、β-catenin 蛋白表达水平升高(P<0. 05),UF、E-cadherin、GSK-3β 蛋白表达水平降低(P<0. 05)。 结论 QCT 通过抑制炎症反应和腹膜间皮-间充质细胞分化进程,从而减轻 PD 大鼠 PF,其作用机制可能与抑制 Wnt / β-catenin 信号通路有关。

摘要:目前多数高校实验动物中心已经开发或使用了实验动物管理系统,但其功能模块和管理的精细化程度以及运行效率参差不齐。 本文在分析高校实验动物管理系统现状的基础上,结合本机构实践经验,开发了基于笼盒的精细化、全流程信息化管理系统,显著提高了实验动物管理效率和透明度,提升了精细化管理和质量管理水平,促进了资源整合与开放共享,为高校实验动物精细化管理工作提供了新思路。

摘要:在哺乳动物中枢神经系统中,突触修剪作为神经发育与功能维持的核心过程,依赖精密的分子与细胞调控,对构建高效稳定的神经网络至关重要。 当突触修剪机制失调时,神经连接的动态平衡被打破,这与多种中枢神经系统疾病的发生发展密切相关。 虽然目前胶质细胞介导的突触消除机制尚未完全明晰,但已知多种促进或抑制突触消除的信号参与其中,共同调控这一复杂过程。 深入剖析调控突触形成与消除的细胞和分子机制,不仅能揭示中枢神经系统疾病的潜在发病机制,更为疾病的早期诊断、干预及创新疗法的开发提供理论依据。 未来对突触修剪机制的持续探索,有望成为攻克神经系统疾病的重要突破口。

摘要:心血管疾病是当前全球发病率和死亡率最高的疾病,但其发病机制研究和药物开发仍面临重大挑战,部分归因于传统研究模型的局限性。 二维(2D)细胞培养难以模拟体内微环境,而动物模型存在物种差异,无法完全重现人类心血管系统的生理和病理特征。 近年来,干细胞技术不断突破,类器官模型研究迅速发展,为心血管机制研究和药物研发提供了创新工具。 心血管类器官是由干细胞在体外三维(3D)培养条件下构建的微组织模型,可高度模拟人体心脏和血管的结构、组成及功能,显著提升研究的生理相关性。 本文系统综述了其构建策略、应用进展,并探讨了当前局限与未来方向。

摘要:阿尔茨海默病(AD)是一种以认知功能障碍和执行功能损害为主的神经退行性疾病。 作为至关重要的先天免疫通路,环磷酸鸟苷-磷酸腺苷合成酶(cGAS)-干扰素基因刺激因子(STING)信号通路在 AD中的异常激活备受关注。 本文讨论了 cGAS-STING 信号通路通过 β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积和异常 tau 蛋白聚集、氧化应激与线粒体功能障碍、神经炎症和神经胶质细胞异常、突触功能障碍、血管功能障碍、肠道菌群失调、自噬功能障碍等机制参与 AD 病程以及干预 cGAS-STING 信号通路治疗 AD 的相关调控网络,旨在揭示cGAS-STING 信号通路的异常激活可能是 AD 发病的重要原因之一,并有望成为治疗 AD 的潜在干预靶点。

摘要:近年来,男性生育能力下降及睾丸相关疾病发病率上升的问题日益凸显,环境毒素、遗传因素、生活方式等是主要诱因,而药物研发中雄性生殖毒性评估亦成为环境安全与药物研发的关键环节。 传统动物实验存在周期长、伦理争议、种属差异及无法模拟睾丸微环境等局限性。 随着 3R 原则的推行,构建高生理相关性体外模型已成必然趋势,3D 培养可模拟体内环境,为睾丸细胞提供适宜 3D 生态位。 本文梳理 3D 培养在睾丸类器官模型中的进展,阐述睾丸生殖细胞生态位组成及对毒性评估的重要性,从技术原理与应用剖析脱细胞睾丸支架、水凝胶支架等 5 种 3D 培养系统的特点与效果,指出不同模型现存差异。 提出未来需关注标准化、多细胞共培养及高通量筛选,以推动其在生殖毒性研究中的应用,助力环境安全评估与药物研发。

摘要:近年来,全球糖尿病发病率呈持续攀升,糖尿病肾脏疾病(DKD)作为糖尿病最常见的微血管并发症之一,已成为终末期肾病的主要致病因素。 寻求安全可靠、副作用较小且经济有效的早期 DKD 治疗药物以延缓其进展,是当前亟待解决的问题。 现代病理学研究指出,腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信号通路在DKD 发生发展过程中发挥关键作用,其通过调控炎症反应、氧化应激、自噬、细胞凋亡、脂质代谢、铁死亡等多种生物学过程,为 DKD 的治疗提供了新的方向和路径。 中医药(TCM)治疗不仅有针对性地缓解患者水肿、蛋白尿、肾功能衰退等,同时显著提高患者生活质量,对 DKD 的早期治疗尤为关键。 研究发现,中药活性成分萜类、黄酮类、酚类和生物碱类等,以及中药复方/ 制剂水陆地黄胶囊、当归补血汤、糖肾宁方、津力达颗粒和火把花根片等对 AMPK 具有显著靶向作用。 本文现将近年来国内外 TCM 调控 AMPK 信号通路防治 DKD 的相关研究进行检索,并归纳和总结作一综述,旨在为 TCM 治疗 DKD 的作用机制和临床功效提供参考依据。

摘要:生理遥测技术通过无线传输实现对自由活动状态下生物体生理参数的实时监测,突破了传统检测方法的空间限制,为心血管药理、神经科学及代谢研究等领域提供了真实可靠的生理数据。 本文系统梳理了植入式与非植入式系统的技术原理及发展现状,总结了传感器微型化、无线能量传输优化及智能算法应用等核心技术进展。 研究进一步分析了不同实验动物模型的适配性及其在心血管、神经科学等领域的应用价值。 未来发展趋势聚焦于柔性电子、智能算法与标准化操作方面持续突破以实现更精准、普适的生理监测,结合人工智能与 3D 打印技术,推动该技术在基础研究与临床转化中的广泛应用。