摘要: 目的 探讨十枣汤诱导乳腺癌裸鼠移植瘤细胞凋亡的作用及相关的分子机制。 方法 培养乳腺癌 SKBR3 细胞并构建其裸鼠移植瘤模型;连续灌胃给药 4 周,观察小鼠肿瘤生长抑制情况;给药结束后处死裸鼠分离移植瘤组织,通过乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测移植瘤组织细胞的 LDH 生成量;Hoechst33342-PI染色观察移植瘤组织细胞的形态学变化;DCFH-DA 染色评估组织细胞活性氧(ROS)含量变化;JC-1 染色评估细胞线粒体膜电位变化;ELISA 法检测肿瘤组织细胞中 Caspase3、Caspase8、Caspase9 酶活性表达;Western blot法检测 Fas、FasL 蛋白表达变化;qPCR 法检测 Caspase3、Caspase8、Caspase9、Fas、FasL 基因表达变化。 结论与模型组比较,十枣汤干预后能使移植瘤组织细胞的 LDH 生成量增加(P<0. 05,P<0. 01),组织细胞呈现典型的凋亡形态学特征,ROS 含量显著增加(P<0. 05),线粒体去极化程度变化显著(P<0. 05,P<0. 01),Caspase3、Caspase8、Caspase9 基因/ 酶活性表达增高( P<0. 05,P<0. 01),Fas、FasL 蛋白/ 基因表达增高( P<0. 05,P<0. 01)。 结论 十枣汤能诱导乳腺癌移植瘤组织细胞的凋亡,Caspase 途径及 Fas/ FasL 途径介导了对乳腺癌组织细胞凋亡的调控。

摘要: 目的 探究长链非编码 RNA(lncRNA)X 染色体失活特异性转录本(XIST)调控滋养层细胞生物学活性的分子机制。 方法 体外培养人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/ Svneo,分为对照组、干扰空载组(转染 siNC)和 si-XIST-1 组(转染 si-XIST-1)、si-XIST-1+anti-NC 组(共转染 si-XIST-1 和 anti-NC)、si-XIST-1+anti-182-5p 组(共转染 si-XIST-1 和 anti-182-5p)。 采用 RT-qPCR 检测细胞中 XIST、miR-182-5p 和低氧诱导因子 2α(HIF-2α)mRNA 表达;CCK-8 实验和 EdU 实验检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕愈合实验、Transwell 实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot 检测细胞中 HIF-2α、cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白(MMP)-2、MMP-9 蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证 miR-182-5p 与 XIST、HIF-2α 的靶向关系。 结论与对照组、干扰空载组比较,si-XIST-1 组 XIST、HIF-2α mRNA 水平、凋亡率及 HIF-2α、cleaved-caspase-3、Bax 蛋白水平降低,miR-182-5p 水平、细胞活力、EdU 阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数及 Bcl-2、MMP-2、MMP-9 蛋白水平升高(P<0. 05);与 si-XIST-1 组和 si-XIST-1+anti-NC 组比较,si-XIST-1+anti-182-5p 组 HIF-2α mRNA 水平、凋亡率及 HIF-2α、cleaved-caspase-3、Bax 蛋白水平升高,miR-182-5p 水平、细胞活力、EdU 阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数及 Bcl-2、MMP-2、MMP-9 蛋白水平降低(P<0. 05)。 lncRNA XIST 可靶向 HTR-8/ Svneo 细胞中的 miR-182-5p,HIF-2α 是 miR-182-5p 的靶标。 结论 敲低 lncRNA XIST 可能是通过竞争性结合 miR-182-5p来抑制 HIF-2α 表达,进而增强 HTR-8/ Svneo 细胞增殖、迁移和侵袭能力,并抑制细胞凋亡。

摘要: 目的 通过白细胞介素-6(IL-6) / 信号转导与转录激活因子 3(STAT3) / 谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)通路探讨瑞芬太尼(Rem)对扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化的作用机制。 方法 于大鼠腹腔注射 2. 5 mg / kg 阿霉素构建 DCM 大鼠模型,将其分为模型(Model)组、Rem 低剂量(Rem-L,2 μg / kg)组、Rem中剂量(Rem-M,4 μg / kg)组、Rem 高剂量(Rem-H,8 μg / kg)组、Rem 高剂量+Colivelin(STAT3 激活剂)(Rem-H+Colivelin,8 μg / kg Rem+1 mg / kg Colivelin)组,每组 12 只。 另设 12 只正常 Wistar 大鼠为对照组(Control)。 连续给药 4 周后,西门子超声仪检测大鼠左室收缩期末径(LVESD)、左室射血分数( LVEF)、左室舒张期末径(LVEDD)、左室短轴缩短率(LVFS);免疫组化法检测大鼠心肌组织Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅲ) 表达;Masson 染色、苏木精-伊红(HE) 检测大鼠心肌组织病理变化;Western blot 检测 IL-6/ STAT3 / GPX4 通路相关蛋白表达。 结论 与 Control 组相比,Model 组大鼠心肌组织LVEDD、LVESD、Col Ⅰ((123. 62±10. 78) vs (76. 53±6. 12))、Col Ⅲ、TGF-β1、IL-6、p-STAT3 ^Tyr705/ STAT3((0. 95±0. 05) vs (0. 46±0. 02))显著升高,LVEF((52. 19±4. 88)% vs(76. 78±6. 97)%)、LVFS、溶质载体家族 7 成员11(SLC7A11)、GPX4((0. 11±0. 01) vs (0. 43±0. 04))显著降低(P<0. 05),出现炎性浸润、胶原蛋白堆积和心肌纤维化现象;与 Model 组相比,Rem-M、Rem-H 组大鼠心肌组织中 LVEDD、LVESD、Col Ⅰ((98. 74±7. 28)、(84. 27±7. 13) vs (123. 62±10. 78))、Col Ⅲ、TGF-β1、IL-6、p-STAT3 ^Tyr705 / STAT3((0. 81±0. 06)、(0. 57±0. 04) vs(0. 95± 0. 05)) 显著降低,LVEF(( 69. 85± 6. 13)%、( 72. 83± 6. 55)% vs( 52. 19 ± 4. 88)%)、LVFS、SLC7A11、GPX4((0. 24±0. 02)、(0. 36±0. 02) vs (0. 11±0. 01))显著升高(P<0. 05),心肌炎性损伤和纤维化有所改善;Colivelin 可逆转 Rem 对 DCM 大鼠心肌纤维化的改善作用。 结论 Rem 可能通过调控 IL-6/ STAT3 / GPX4 通路,减少胶原蛋白堆积,改善 DCM 大鼠心肌纤维化及心功能。

摘要: 目的 通过自体粪菌移植(AFMT)干预,观察氧化偶氮甲烷(AOM) / 葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎相关结直肠癌(CAC)小鼠结肠肿瘤情况,探究 AFMT 通过影响紧密连接蛋白发挥的抑瘤作用及其机制。 方法 SPF 级雌性 BALB/ c 小鼠随机分为空白对照组、CAC 模型组和 AFMT 干预组,每组 8 只。 CAC 模型组按照 10 mg / kg 腹腔注射 AOM 1 次,连续饮用 3. 5% DSS 7 d,连续饮用 0% DSS 14 d,为 1 个循环,共计 3个循环,构建 CAC 模型;AFMT 干预组在构建 CAC 模型时同步给予 0. 1 mL 自体菌液隔天灌胃至循环结束;空白对照组无特殊处理。 观察小鼠基本情况并记录体质量。 实验结束后测量结肠长度和记录肿瘤数目,进行结肠病理学检查,使用 Western blot 和 RT-qPCR 检测结肠组织 Occludin(OCLN)、Claudin-1(CLDN1)的 mRNA 和蛋白表达水平,同时采用 16S rRNA 测序技术对各组小鼠粪便样本菌群进行鉴定分析。 结论 与空白对照组相比,CAC 模型组结肠长度显著缩短(P<0. 0001),肿瘤数目明显增多。 经 AFMT 干预后,小鼠结肠长度缩短减轻(P<0. 01),肿瘤数目减少(P<0. 05)。 小鼠结肠组织学检查可见 CAC 模型组结肠隐窝结构扭曲,杯状细胞减少,炎性细胞数量增加(P<0. 01),经 AFMT 干预后,隐窝结构和杯状细胞有所改善,炎性细胞减少(P<0. 05)。 与空白对照组相比,CAC 模型组小鼠结直肠肿瘤组织中 Occludin 和 Claudin-1 的蛋白表达水平显著降低(P<0. 05,P<0. 01),经 AFMT 干预后结直肠肿瘤组织中 Occludin、Claudin-1 的蛋白表达水平显著上升(P<0. 05)。 与空白对照组相比,CAC 模型组中 OCLN 和 CLDN1 的 mRNA 表达水平显著下调(P<0. 05);经 AFMT 干预后,其 mRNA 表达水平显著回升(P<0. 05)。 与空白对照组相比,AFMT 干预组厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidota)相对丰度差异无统计学意义(P>0. 05),CAC 模型组 Firmicutes 相对丰度降低(P<0. 05),Bacteroidota 相对丰度增高(P<0. 05)。 结论 AFMT 干预可恢复肠道 Firmicutes 相对丰度,降低 Bacteroidota 相对丰度,有效改善肿瘤环境中紧密连接蛋白的异常表达,修复肠道屏障,从而调节肠道屏障功能,改善肠道炎症,有效缓解 CAC 病理进程。

摘要: 目的 探讨黑皮质素受体激动剂(MT-II)改善 SH3 和多个锚蛋白重复结构域 3(Shank3)基因缺陷孤独症模型鼠社交缺陷的作用机制。 方法 利用 Shank3 干扰慢病毒和空载慢病毒注射至仔鼠右侧脑室构建 Shank3 模型鼠和空载鼠各 18 只,Shank3 组随机分为 Shank3+Sal(Sh3-Sal)组 9 只和 Shank3+MT-II(Sh3-MT-II)组 9 只,空载组随机分为空载+Sal(V-Sal)组 9 只和空载+MT-II(V-MT-II)组 9 只。 V-MT-II 组和 Sh3-MT-II 组于第 28 天腹腔注射 3. 3 mL / kg MT-II,V-Sal 组和 Sh3-Sal 组腹腔注射 3. 3 mL / kg 0. 9%氯化钠溶液,通过旷场实验、理毛实验、三箱社交实验及 Morris 水迷宫实验评估其行为学改变;采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测下丘脑催产素(OXT)、催产素受体(OXTR)及黑皮质素受体 4(MC4R)的 mRNA 与蛋白表达水平。 结论 行为学结果显示,三箱社交实验中与陌生鼠 1 相比,Sh3-Sal 组未表现出社交差异(P>0. 05),而 MT-II 干预后,Sh3-MT-II 组与陌生鼠 2 的社交时间显著增加,差异有统计学意义(P<0. 01)。 Morris 水迷宫实验中与 V-Sal 组相比,Sh3-Sal 组表现出显著的学习记忆障碍(P<0. 05),而 MTII 干预后,Sh3-MT-II 组学习记忆能力明显提高,差异有统计学意义(P<0. 01)。 旷场实验和理毛实验结果显示,与 V-Sal 组相比,Sh3-Sal 组周边停留时间及理毛时间均显著增加,差异有统计学意义(P<0. 01);MT-II 干预后,旷场中心停留时间及理毛行为与 Sh3-Sal 组无显著差异(P>0. 05)。 RT-PCR 检测显示,与 Sh3-Sal 组相比,Sh3-MT-II 组 OXT、OXTR 和 MC4R mRNA 表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0. 05);Western blot 法检测显示,与 Sh3-Sal 组相比,Sh3-MT-II 组大鼠下丘脑 OXT 蛋白表达水平明显升高(P<0. 05),与 V-Sal 组相比,Sh3-Sal 组和 Sh3-MT-II 组大鼠下丘脑 SHANK3 蛋白表达水平明显降低(P<0. 05,P<0. 01),而 OXTR 及MC4R 蛋白表达水平无显著差异(P>0. 05)。 结论 黑皮质素受体激动剂 MT-II 可能通过激活下丘脑 OXT 系统改善 Shank3 缺陷孤独症模型鼠的社交障碍,提示靶向 OXT / MC4R 通路或为孤独症社交缺陷的潜在干预策略。

摘要: 目的 肺腺癌( LUAD) 预后不佳,本研究旨在筛选与肿瘤微环境( TME) 和程序性细胞死亡(PCD)相关的核心预后基因,为 LUAD 提供新的预后标志物和治疗靶点,并验证其跨物种保守性。 方法 基于 TCGA 数据库 LUAD 和正常肺组织 RNA-seq 数据,利用 ESTIMATE 算法评估 TME 并筛选差异表达基因(DEGs)。 对 DEGs 进行功能富集(GO/ KEGG)、蛋白质互作(PPI)网络和单变量 COX 回归分析。 联合 PPI 网络、单变量 COX 回归与 PCD 基因组进行交叉筛选,以确定核心预后基因。 通过生存分析、基因组富集(GSEA)和免疫浸润(CIBERSORT)分析验证其预后价值和 TME 关联。 结论 高免疫/ ESTIMATE 评分与患者生存期延长显著相关。 筛选出的共享 DEGs 主要富集于免疫相关通路。 交叉分析确定 CD19 和 CD79A 为与PCD 相关的核心预后基因。 临床特征分析显示,CD19 和 CD79A 在 LUAD 肿瘤组织中的表达显著高于正常肺组织,但其表达水平随 TNM 分期进展而显著下降,与晚期分期、远处转移及不良预后密切相关。 生存分析表明,CD19 / CD79A 高表达的 LUAD 患者总生存期显著长于低表达患者。 动物模型验证了 CD19 / CD79A 在肿瘤进展中的跨物种保守作用。 GSEA 分析表明,CD19 / CD79A 高表达组显著富集于免疫激活通路(如异体移植排斥、补体反应),而低表达组则富集于代谢(糖酵解、氧化磷酸化)及促癌通路。 免疫浸润(CIBERSORT)分析进一步证实其表达水平与 TME 免疫活性呈显著正相关。 结论 CD19 和 CD79A 在 LUAD 肿瘤组织中表达升高,但其表达水平随疾病进展而降低。 高表达 CD19 / CD79A 与良好预后及免疫激活的 TME 密切相关,而低表达则提示不良预后并与免疫抑制/ 促癌状态相关。 CD19 和 CD79A 是 PCD 相关基因,可作为 LUAD 潜在的保护性预后生物标志物和免疫治疗靶点,为理解 LUAD 免疫机制及开发 B 细胞靶向治疗策略提供依据。

摘要: 目的 基于含 NLR 家族 pyrin 结构域 12(NLRP12) 调控巨噬细胞泛凋亡探讨游离血红素(Heme)对脓毒症免疫抑制模型小鼠的影响。 方法 构建脓毒症模型小鼠并将其分为模型(Model)组、游离血红素(Heme)组、游离血红素+阴性对照质粒转染(Heme+si-NC) 组、游离血红素+NLRP12 低表达质粒转染(Heme+si-NLRP12)组,每组 12 只小鼠。 另取 12 只仅暴露盲肠不进行结扎和穿刺的小鼠作为假手术(Sham)组。 检测各组小鼠血清中炎症因子水平(ELISA 法)、CD4⁺/ CD8⁺比值(流式细胞术法)、肺组织病理变化(HE染色法)、细胞凋亡情况(TUNEL 染色法)、肺组织中泛凋亡相关蛋白表达量(Western blot 法)。 为进一步明确Heme 调节 NLRP12 的作用机制,以 LPS 感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)诱导脓毒症细胞模型,并将其分为 LPS 组、LPS+Heme 组、LPS+Heme+si-NC 组、LPS+Heme+si-NLRP12 组,以正常培养的 BMDM 作为对照(Control)组。 检测 BMDM 上清炎性因子水平(ELISA 法)、细胞存活率(CCK-8 法)、凋亡率(TUNEL 法)及泛凋亡相关蛋白表达水平(Western blot 法)。 结论 与 Model 组比较,Heme 组可进一步提高脓毒症小鼠血清炎症因子水平、加重肺组织损伤和细胞凋亡、促进细胞的泛凋亡进展,降低血清 CD4⁺/ CD8⁺ 比值(P<0. 05);与Heme+si-NC 组比较,Heme+si-NLRP12 组脓毒症小鼠肺组织病理损伤及泛凋亡过程减轻、血清炎症因子水平及肺组织细胞凋亡率下降、血清 CD4⁺/ CD8⁺比值升高(P<0. 05)。 细胞实验显示 LPS 组细胞存活率显著下降、细胞泛凋亡过程及上清炎性因子水平明显增加(P<0. 05);LPS+Heme 组相较于 LPS 组细胞凋亡率、泛凋亡过程及炎性因子水平进一步增加(P<0. 05);与 LPS+Heme+si-NC 组比较,LPS+Heme+si-NLRP12 组细胞存活率显著增加、凋亡率及上清炎性因子水平降低,NLRP12、Bax、Caspase-8、p-RIPK3 及 GSDMD-N 表达量显著下降(P<0. 05)。 结论 Heme 可能通过上调 NLRP12 的表达诱导巨噬细胞泛凋亡,进而加强脓毒症的免疫抑制作用。

摘要:动物实验课程是生命科学领域关键的实践环节,但传统教学常偏重理论传授,存在能力培养不足、伦理安全意识薄弱、实验脱离实际及创新训练缺乏等问题。 为破解此困境,本研究引入成果导向教育(OBE)理念,构建以学生能力为核心的动物实验课程体系。 基于 OBE 确立基础知识掌握、实验技能熟练与综合素质提升三维目标,采用“内容构思—方案设计—过程实施—经验总结”的闭环框架。 以真实科研项目为载体,通过项目库建设、过程性评价及团队协作模式,有机融合理论、技能与科研能力培养。 实践表明,OBE模式显著提升了学生的知识掌握度、技能熟练度及教学满意度,有效培养了其团队协作、问题解决与创新思维能力,为提升动物实验课程质量及培养高素质科研人才提供有效路径。

摘要:蛋白质翻译后修饰(PTMs)是调控蛋白质功能的重要机制,乳酸化修饰作为一种新兴的 PTM类型,近年来逐渐成为研究热点。 其通过动态调控基因表达和蛋白活性参与肿瘤、炎症等病理过程,在代谢-免疫协同调控中具有重要作用。 在骨关节退变性疾病(如骨关节炎或椎间盘退变性疾病等)中,软骨组织代谢失衡与乳酸化修饰动态变化密切相关,涉及基质降解、滑膜炎症及骨重塑异常等病理环节,但现有临床干预手段无法阻断疾病进展。 本文系统综述乳酸化修饰的分子机制(包括乳酸代谢、组蛋白与非组蛋白乳酸化)、调控因素(酶、环境、分子工具)及其在骨关节退变性疾病中的研究进展,涵盖软骨组织表达变化、与疾病进展的关联及临床模型中的标记物研究。 结果表明,乳酸化修饰通过调控糖酵解-氧化磷酸化平衡、炎症因子表达及细胞外基质代谢影响骨关节退变,针对乳酸化修饰的靶向调控(如 CRISPR 编辑、小分子抑制剂)有望成为骨关节退变性疾病的新型治疗策略。 未来需突破检测技术瓶颈,通过跨学科合作解析乳酸化动态网络,推动其在早期诊断、精准干预及个性化治疗中的临床转化。

摘要:血脑屏障(BBB)是介于血液和脑组织之间的对物质通过有选择性阻碍作用的动态界面,对维持中枢神经系统(CNS)内环境稳定起着关键作用。 近年来,研究发现 BBB 的调节机制涉及多种因素,包括细胞间紧密连接的动态变化、信号通路的激活、神经血管单元的相互作用等。 本文综述了现阶段 BBB 的多种临床干预措施,包括药物治疗、基因治疗、中医药干预等及其未来可能的发展,以期为神经系统疾病的治疗提供新的思路和理论依据。

摘要:炎性痛与抑郁症是临床常见疾病,二者具有高共病率,且能够相互加剧彼此病程,严重降低患者生活质量。 炎性痛与抑郁共病的发病机制极为复杂,为临床诊疗带来严峻挑战。 近年研究发现,神经炎症的持续激活是炎性痛与抑郁共病的核心病理环节。 运动作为一种非药物手段,可有效改善共病患者的疼痛和抑郁症状,然而其具体的作用机制尚未完全明确。 本文对运动在抑制中枢炎症水平、调节小胶质细胞 M1 / M2极化平衡、调控神经元兴奋-抑制稳态以及促进海马神经发生方面的最新研究进行总结,系统综述运动调节神经炎症治疗炎性痛与抑郁共病的分子及神经机制,以期为临床运动治疗提供新的理论基础和实践参考。

摘要:血脑屏障(BBB)在维持脑稳态方面发挥重要作用,其功能障碍与多种神经退行性疾病以及急性脑损伤密切相关,不仅影响大脑的防御机制,还可能加剧病理状态的进展。 一氧化氮(NO)作为一种重要的生物信号分子,在中枢神经系统中作用广泛,其影响不仅局限于生理状态,还包括多种病理状态的调节作用。本文综述了 NO 的生成与代谢及其对 BBB 通透性的影响,分别介绍 NO 在脑缺血再灌注损伤、神经退行性疾病及脑肿瘤等病理条件中的作用,并着重强调 NO 通过紧密连接蛋白、血管内皮生长因子受体 2(VEGFR2)等对 BBB 完整性的调节。 进一步探讨 NO 作为治疗靶点在药物递送和基因治疗中的潜力以及 NO 在增强药物跨越 BBB 方面的可能性,为未来相关治疗策略提供了新思路。

摘要:系统综述卵巢储备功能减退(DOR)模型的构建方式及其病理机制,为深入理解 DOR 的病理生理机制提供理论依据,并为未来相关药物开发及治疗策略的制定提供参考。 广泛检索并分析近年来相关文献,详细梳理多种造模因素(包括药物诱导、环境因素、生物因素等)所构建的 DOR 模型方式,并深入探讨其病理机制在 DOR 发生发展中的作用。 DOR 的发病机制涉及氧化应激、细胞凋亡与自噬、血管生成障碍及卵泡发育与免疫微环境失衡等多种因素。 研究还发现 DOR 模型中出现的相关通路之间存在内在关联性。 现有DOR 造模方法虽能高度模拟西医病理特征,但具备明确中医证候的“病证结合”模型极为匮乏。 鉴于中医药在干预 DOR 复杂病理网络中展现出的多靶点调控优势,未来研究亟需构建高质量的病证结合 DOR 模型,并采用多维验证标准,以科学阐释中医药的整体调控机制,为 DOR 的诊治提供坚实理论基础。